新霉素是在弗氏鏈霉菌發(fā)酵過程中產(chǎn)生的一種廣譜水溶性氨基糖苷類抗生素,對部分革蘭氏菌的生長具有較好的抑制作用。其治療范圍狹窄,與其它氨基糖苷類抗生素藥物一樣具有潛在毒性,可能引起耳毒性和腎毒性。但硫酸新霉素（新霉素的硫酸鹽）作為一種理想的干擾蛋白質(zhì)合成的殺菌劑,在臨床和獸醫(yī)學(xué)中得到了廣泛的應(yīng)用。本研究首先基于多孔板發(fā)酵與酶標(biāo)儀檢測,建立及優(yōu)化硫酸新霉素產(chǎn)生菌高通量選育模型,提高誘變后突變株的篩選效率;并經(jīng)過6輪ARTP誘變結(jié)合鏈霉素抗性篩選,獲得高產(chǎn)突變株Sf6-2;最后利用響應(yīng)面法對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,成功提高了高產(chǎn)菌株Sf6-2的發(fā)酵效價。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:（1）硫酸新霉素產(chǎn)生菌高通量選育模型的建立及優(yōu)化。對影響酶標(biāo)儀檢測的主要影響因素1.0×10-4 mol/L曲利本藍(lán)溶液的添加量（μL）進(jìn)行優(yōu)化,并建立相應(yīng)的分光光度法;對適用高通量篩選模型的微孔板種類進(jìn)行選擇,并對其發(fā)酵條件進(jìn)行正交優(yōu)化。結(jié)果表明,硫酸新霉素在1.284～10.272 U/mL范圍內(nèi),只有當(dāng)曲利本藍(lán)溶液的添加量為500 μL時,吸光度與樣品濃度呈良好的線性關(guān)系,線性方程為:Y=0.0320X-0.0262（... 

【文章來源】：安徽工程大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１新霉素Ｂ?（左）和Ｃ?（右）化學(xué)結(jié)構(gòu)式??Ｆｉ．?１－１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｆｏｒｍｕｌａ?ｏｆ?Ｎｅｏｍｃｉｎ?Ｂ?ａｎｄ?Ｃ??

１．４新霉素的測定方法??１．４．１微生物法??新霉素的微生物測定方法主要是管碟法和比濁法。??管碟法［２５］：在試驗過程中，微生物在瓊脂培養(yǎng)基的表面上生長，微生物形??成的抑菌圈（即抗生素擴散區(qū)域）直徑會與抗生素濃度成正比。盡管此方法常被??用于抗生素的效價測定之中，但是管碟法與比濁法相比也有缺點，如靈敏度小、??孵育時間長（約１８小時）以及由于擴散問題而造成的限制。??比濁法［２６］：在用此方法進(jìn)行效價測定時，根據(jù)不同抗生素濃度的液體培養(yǎng)??基中微生物生長情況不同，會提供了一個可見的濁度，可在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)后??進(jìn)行光度測量。相比于管碟法，用比濁法測定培養(yǎng)液中微生物的生長提供了更快??的速度（約６小時）并且沒有擴散問題的限制。但是此方法微生物的選擇、培養(yǎng)??基成分、接種比例、和新霉素濃度等都會影響微生物的生長，由于這些限制因素??

生高活性粒子直接作用于細(xì)胞中生物大分子，對ＤＮＡ造成損傷，從而性突變。》３〇６１？１＾？３１１等［４７］基于抗性平板與９６微孔板，建立高通量篩采用ＡＲＴＰ誘變工程菌－枯草芽孢桿菌以提高尿苷的產(chǎn)量，最終體Ｈ２６在搖瓶中發(fā)酵３０?ｈ，在補料分批發(fā)酵４８?ｈ后，分別積累５．７?ｇ／３０．３?ｇ／Ｌ尿苷，是出發(fā)菌株的４．４倍和８．７倍。??ＡＲＴＰ自２０１３年問世以來，己經(jīng)在中國、新加坡、日本等國家得到了用。目前使用ＡＲＴＰ進(jìn)行誘變育種己達(dá)一百多種微生物、動植物，都獲的遺傳優(yōu)良性狀。ＡＲＴＰ服務(wù)于８０余家國內(nèi)外生物技術(shù)企業(yè)和科研院直接經(jīng)濟效益７４６７萬元。使用本儀器的高校、研究院所和企業(yè)等單位，文學(xué)術(shù)論文５０４篇，申請專利５９項，應(yīng)用ＡＲＴＰ產(chǎn)生的經(jīng)濟效益達(dá)６。由于此項技術(shù)在各領(lǐng)域中的成功應(yīng)用以及社會上產(chǎn)生的良好經(jīng)濟效應(yīng)，術(shù)已于２０１４？２０１７年相繼獲得中國專利獎金獎、第４５屆日內(nèi)瓦國際發(fā)金獎和泰國優(yōu)秀發(fā)明獎。??＊＊＊＊＊?？■＊??


本文編號：3365304