L-2-氨基丁酸（L-ABA）是一種非蛋白質(zhì)氨基酸,作為重要的醫(yī)藥中間體用于眾多手性藥物的合成。近年來(lái),在制藥和化工領(lǐng)域,隨著市場(chǎng)對(duì)L-ABA需求的增長(zhǎng),高效制備光學(xué)純度高的L-ABA已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。本研究基于代謝工程技術(shù),通過(guò)在Escherichia coli W3110中延伸代謝途徑來(lái)構(gòu)建基因工程菌株發(fā)酵生產(chǎn)L-ABA。L-ABA可以L-蘇氨酸為前體經(jīng)蘇氨酸脫氨酶和亮氨酸脫氫酶催化而制得。本研究首先根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道構(gòu)建了L-蘇氨酸的生產(chǎn)菌株E.coli THR,搖瓶發(fā)酵48 h可生產(chǎn)L-蘇氨酸12.45 g/L。隨后,將來(lái)源于E.coli W3110的編碼蘇氨酸脫氨酶的基因ilvA在E.coli THR中過(guò)量表達(dá),獲得生產(chǎn)α-酮丁酸（2-KB）的菌株E.coli THR/pTrc-ilvA,搖瓶發(fā)酵結(jié)果顯示,E.coli THR/pTrc-ilvA能夠代謝L-蘇氨酸生產(chǎn)2-KB,產(chǎn)量為4.38 g/L,對(duì)基因ilvA進(jìn)行定點(diǎn)突變（T1054G,T1055C,C1084T,G1085,T1086C,即F352A和R362F）解除L-異亮氨酸的反饋抑制后,菌株E.coli THR/pTr... 

【文章來(lái)源】：浙江工業(yè)大學(xué)浙江省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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氨化水解法合成L-ABA的工藝路線

重組大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn) L-2-氨基丁酸的研究上串聯(lián)表達(dá)，最終通過(guò)不同的組合方式構(gòu)建得到 7 種重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入 的生產(chǎn)菌株中得到七種工程菌。將構(gòu)建所得菌株分別在 5 L 發(fā)酵罐中發(fā)酵60 h 后，工程菌 THR/pSUGAP-ilvA-leuDH 的 L-ABA 產(chǎn)量最高，為 20 g/L99%。 天冬氨酸家族氨基酸代謝機(jī)制概述天冬氨酸家族氨基酸（AFAAs），如圖 1-8 所示，包括 L-蘇氨酸、L-賴氨酸亮氨酸和 L-蛋氨酸等氨基酸，在食品、化妝品和醫(yī)藥等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)1]。隨著 AFAAs 的市場(chǎng)需求增加，同時(shí)考慮到生產(chǎn)成本和環(huán)境影響等因素

浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鍵步驟[34]。LysE 是 C. glutanmicum 中主要負(fù)責(zé)堿性氨基酸 (賴氨 的分泌蛋白，在 C. glutanmicum 中過(guò)表達(dá) lysE 基因可以使 L-賴氨5 倍[35]，而且該基因也能夠在其它菌株中進(jìn)行表達(dá)從而使其 L-賴氨升。在 E. coli 中，基因 yahN 編碼 L-賴氨酸的分泌蛋白，該基因通有助于提高 L-賴氨酸產(chǎn)量[36]。③提升胞內(nèi) NADPH 利用率：在 L-合成過(guò)程中，以草酰乙酸為起始前體出發(fā)每合成 1 分子的 L-賴氨4 分子的 NADPH，所以提升胞內(nèi) NADPH 的利用率顯得極為重要。icum 中常用的手段是運(yùn)用基因編輯技術(shù)將代謝通量從 EMP 途徑導(dǎo)徑，如敲除磷酸葡萄糖異構(gòu)酶基因[37]，過(guò)表達(dá)果糖 1,6-二磷酸酯酶糖-6-磷酸脫氫酶基因[39]。但是磷酸戊糖途徑的碳源利用率比 EMP

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]高產(chǎn)琥珀酸大腸桿菌的代謝工程[D]. 王慶昭.天津大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3365070