4-羥基異亮氨酸（4-hydroxyisoleucine,4-HIL）是一種具有促進胰島素分泌、調(diào)節(jié)血脂異常、促進脂肪代謝等功能的非蛋白質(zhì)氨基酸,在治療糖尿病方面具有潛在的價值。實驗前期研究已從土壤中篩選獲得一株含異亮氨酸雙加氧酶（ido）基因的芽孢桿菌,并在大腸桿菌中克隆表達,構(gòu)建了將L-異亮氨酸（L-isoleucine,L-ILe）一步催化合成4-HIL的重組菌。本研究基于重組IDO催化異亮氨酸羥基化的性質(zhì)和條件對反應(yīng)過程進行調(diào)控,擴大轉(zhuǎn)化體系探究高底物濃度下的轉(zhuǎn)化效率,進一步提高4-HIL的產(chǎn)量。其主要研究結(jié)果如下:（1）外源添加L-ILe,以重組大腸桿菌E.coli BL21/pET28a-ido作為催化酶源,基于IDO催化異亮氨酸羥基化的生物轉(zhuǎn)化條件,在搖瓶水平進行單因素優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)采用誘導(dǎo)16 h的靜止態(tài)全細胞作為催化劑的轉(zhuǎn)化效果最佳,且在α-酮戊二酸（α-KG）與底物摩爾濃度比為1:1,Fe²⁺2 g·L^-1、Vc 5 mmol·L^-1條件下,全細胞催化效率最好,在300mmol·L^-... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

加氧酶催化典型的反應(yīng)Fig.1-3Oxygenasecatalyzestypicalreactions

圖 2-1 底物 L-Ile 濃度與峰面積的關(guān)系Fig. 2-1 Relationship between L-Ile concentrarion and peak area得到峰面積-L-Ile 濃度標(biāo)準曲線方程為： 0.0185 R2=0.9994面積 y：L-Ile 濃度（g·L-1）

圖 2-2 產(chǎn)物 4-HIL 濃度與峰面積的關(guān)系Fig. 2-2 Relationship between 4-HILconcentration and peak area得到峰面積-4-HIL 濃度標(biāo)準曲線方程為：7 0.1024 R2=0.9991峰面積 y：4-HIL 濃度（g·L-1）

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]重組L-異亮氨酸雙加氧酶酶學(xué)特性及其重組體系合成羥基異亮氨酸的研究[D]. 文方.江南大學(xué) 2016
[2]微生物異亮氨酸雙加氧酶的篩選和表達及其轉(zhuǎn)化合成羥基異亮氨酸[D]. 付敏杰.江南大學(xué) 2014



本文編號：3329989