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基于多孔層開管毛細(xì)管柱的固定化酶微反應(yīng)器和毛細(xì)管電色譜的研究與應(yīng)用

發(fā)布時(shí)間:2021-08-02 16:28
  固定化酶微反應(yīng)器(IMERs)是將生物酶分子的固定化技術(shù)與微通道內(nèi)生物酶反應(yīng)相結(jié)合而制備的一類酶反應(yīng)系統(tǒng);陂_管毛細(xì)管柱的固定化酶微反應(yīng)器不僅兼具酶的高選擇性催化、可重復(fù)使用及微通道分析的低試劑消耗、易分離等優(yōu)點(diǎn),而且微反應(yīng)器制備簡(jiǎn)單,操作方便,易于與其它分析設(shè)備相連接,使其在生命科學(xué)如酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)、抑制劑的篩選、蛋白質(zhì)組學(xué)以及生物催化等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。對(duì)于如何提高固定化酶微反應(yīng)器的性能,包括催化效率和穩(wěn)定性等,毛細(xì)管柱內(nèi)的酶固定化技術(shù)至關(guān)重要,也是目前相關(guān)研究領(lǐng)域備受關(guān)注的研究方向。與毛細(xì)管固定化酶微反應(yīng)器相對(duì)應(yīng),毛細(xì)管色譜柱的制備是毛細(xì)管電色譜高效分離分析的核心部分,也是電色譜理論和應(yīng)用研究的重點(diǎn),對(duì)毛細(xì)管電色譜技術(shù)的發(fā)展起著舉足輕重的作用,目前已經(jīng)成為一種迅速發(fā)展起來(lái)的新興技術(shù)。本論文圍繞新型開管毛細(xì)管柱在固定化酶微反應(yīng)器和毛細(xì)管電色譜的研究與應(yīng)用,展開了以下研究工作:1、提出了基于三維多孔層開管毛細(xì)管柱(3D-PLOT)的開管毛細(xì)管固定化酶微反應(yīng)器,并成功應(yīng)用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白在線水解以及HeLa細(xì)胞的蛋白組學(xué)研究。我們通過(guò)簡(jiǎn)單易控的原位一步兩相合成法,實(shí)現(xiàn)了石英毛細(xì)管內(nèi)表面的多... 

【文章來(lái)源】:東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【部分圖文】:

基于多孔層開管毛細(xì)管柱的固定化酶微反應(yīng)器和毛細(xì)管電色譜的研究與應(yīng)用


ERY-ZHM有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化整體柱的制備示意圖

交聯(lián)試劑,優(yōu)缺點(diǎn)比較,擴(kuò)散限制,缺點(diǎn)


Fig 1-4 Enzyme immobilized methods.[47]圖 1-4 固定酶的方法。Table 1-2 Comparative evaluation of merits and demerits of various immotypes.[45-47,56]表 1-2 各種固定類型優(yōu)缺點(diǎn)比較固定類型 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)吸附 易于操作 無(wú)孔隙擴(kuò)散限制 不需交聯(lián)試劑 活化步驟少 成本相對(duì)便宜× 效率較低× 酶容易從載體

示意圖,微反應(yīng)器,開管,固定化酶


Fig 1-5 Schmatic diagram of the OT-IMER.[83]圖 1-5 開管式固定化酶微反應(yīng)器示意圖。與開管式固定化酶微反應(yīng)器相比,整體柱式固定化酶微反應(yīng)器有更好的穩(wěn)定性,但制備過(guò)程復(fù)雜,在毛細(xì)管內(nèi)將有機(jī)高分子材料以原位聚合的方式固定酶。如 Cheng 等[84]的工作,用具有兩個(gè)羧基多功能基團(tuán)的衣康酸試劑將胰蛋白酶固定于整體柱內(nèi),制備了整體柱式酶微反應(yīng)器,用于在線水解蛋白質(zhì)和分離多肽,如圖 1-6 所示。填充式毛細(xì)管固定化酶微反應(yīng)器是將已經(jīng)制備好負(fù)載酶的填料,填入毛細(xì)管中而形成填充式酶反應(yīng)器。我們課題組基于單顆粒填充技術(shù)[95],將固載有胰蛋白酶的二氧化硅顆粒填充至內(nèi)徑為 100 μm 的毛細(xì)管中,制備了填充式酶微反應(yīng)器用于在線水解蛋白質(zhì),如圖 1-7 所示。近十年來(lái),毛細(xì)管固定化酶微反應(yīng)器作為一種重要的酶分析工具得到了廣泛[85]

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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博士論文
[1]基于毛細(xì)管電泳—酶微反應(yīng)器的酶分析及其抑制動(dòng)力學(xué)研究[D]. CAMARA MOHAMED AMARA.東北師范大學(xué) 2016

碩士論文
[1]基于毛細(xì)管酶微反應(yīng)器的酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究[D]. 尹正日.東北師范大學(xué) 2014
[2]海藻酸鈉固定化α-淀粉酶的研究[D]. 鄭璐.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào):3317896

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