酶聯(lián)免疫吸附分析方法（ELISA）是一種成熟的、可用于定性或定量檢測(cè)的免疫分析方法,具有較高的靈敏度和較強(qiáng)的特異性。本文利用ELISA建立兩種物質(zhì)的定量分析方法,這兩種物質(zhì)分別是植物激素茉莉酸類物質(zhì)和抗癌藥物五氟尿嘧啶。茉莉酸類（JAs）物質(zhì)主要包括茉莉酸（JA）和茉莉酸甲酯（MeJA）,是一類可調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆性的植物激素。JAs在植物體內(nèi)含量很低,不當(dāng)?shù)厥褂猛庠葱訨A或MeJA還會(huì)降低生態(tài)效益。且JA和MeJA在生理功能上具有一定的差異,同時(shí)檢測(cè)JA和MeJA仍然是植物生物學(xué)家面臨的難題。因此,有必要建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)的方法,用于檢測(cè)植物中JA和MeJA各自的含量。本文第一部分運(yùn)用雜交瘤抗體制備技術(shù),制備了針對(duì)茉莉酸的單克隆抗體（mAb）,并以mAb為基礎(chǔ),結(jié)合兩種樣品提取法方法,建立了同時(shí)測(cè)定JA和MeJA的ELISA。所建立的ELISA的半抑制濃度（IC50）和檢出限（LOD）值分別為2.02 ng mL-1和0.201 ng mL-1。交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所建立的ELISA特異性良好。加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的回收率在79.6-89.5%,在可接受范圍內(nèi),且與HPLC方法相... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 免疫分析方法概述
        1.2.1 免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史
        1.2.2 免疫分析方法的基本原理
    1.3 酶聯(lián)免疫吸附分析方法簡(jiǎn)述
        1.3.1 ELISA的基本原理
        1.3.2 ELISA的分類
        1.3.3 ELISA方法的建立
        1.3.4 ELISA的現(xiàn)狀
    1.4 茉莉酸類物質(zhì)概述
        1.4.1 茉莉酸類物質(zhì)簡(jiǎn)介
        1.4.2 茉莉酸與茉莉酸甲酯的區(qū)別
        1.4.3 茉莉酸和茉莉酸甲酯的檢測(cè)方法
    1.5 抗癌藥物五氟尿嘧啶概述
        1.5.1 五氟尿嘧啶簡(jiǎn)介
        1.5.2 五氟尿嘧啶在臨床使用中的局限性
        1.5.3 五氟尿嘧啶的檢測(cè)方法
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 茉莉酸單克隆抗體的制備
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        2.2.3 溶液配制
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.3 茉莉酸單克隆抗體的制備
        2.3.1 茉莉酸免疫原、包被原的制備
        2.3.2 動(dòng)物的免疫流程
        2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.4 雜交瘤細(xì)胞的凍存
        2.3.5 單克隆抗體的大量生產(chǎn)
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 茉莉酸免疫原、包被原的合成
        2.4.2 小鼠抗血清效價(jià)的測(cè)定
        2.4.3 雜交瘤細(xì)胞的篩選
        2.4.4 雜交瘤細(xì)胞的亞克隆
        2.4.5 單克隆抗體的生產(chǎn)
    2.5 本章小結(jié)
第三章 茉莉酸甲酯酶聯(lián)免疫吸附分析方法的建立
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        3.2.3 溶液配制
    3.3 實(shí)際樣品提取方法的建立
    3.4 茉莉酸甲酯ic-ELISA的建立
        3.4.1 檢測(cè)茉莉酸甲酯的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA的步驟
        3.4.2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.4.3 方法特異性的考察
        3.4.4 甲醇對(duì)ic-ELISA結(jié)果的影響
        3.4.5 方法準(zhǔn)確性的考察
        3.4.6 實(shí)際樣品的檢測(cè)
        3.4.7 HPLC檢測(cè)方法
    3.5 結(jié)果與討論
        3.5.1 茉莉酸甲酯ic-ELISA條件優(yōu)化
        3.5.2 茉莉酸甲酯ic-ELISA方法特異性
        3.5.3 甲醇對(duì)茉莉酸甲酯ic-ELISA的影響
        3.5.4 茉莉酸甲酯ic-ELISA方法準(zhǔn)確性
        3.5.5 植物樣品的檢測(cè)
        3.5.6 本方法與其他方法的比較
    3.6 本章小結(jié)
第四章 五氟尿嘧啶抗體的制備與ic-ELISA的建立
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        4.2.3 溶液配制
    4.3 五氟尿嘧啶多克隆抗體的制備
        4.3.1 五氟尿嘧啶半抗原的修飾
        4.3.2 五氟尿嘧啶免疫原、包被原的制備
        4.3.3 動(dòng)物的免疫流程
        4.3.4 兔抗血清效價(jià)的測(cè)定
        4.3.5 多克隆抗體的收集
    4.4 檢測(cè)五氟尿嘧啶的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA的建立
        4.4.1 五氟尿嘧啶ic-ELISA的步驟
        4.4.2 五氟尿嘧啶ic-ELISA條件優(yōu)化
        4.4.3 五氟尿嘧啶ic-ELISA方法特異性
    4.5 結(jié)果與討論
        4.5.1 五氟尿嘧啶多克隆抗體的制備
        4.5.2 五氟尿嘧啶ic-ELISA方法的建立
    4.6 五氟尿嘧啶單克隆抗體的制備
        4.6.1 動(dòng)物的免疫流程
        4.6.2 單克隆抗體的制備
    4.7 結(jié)果與討論
        4.7.1 小鼠抗血清效價(jià)的測(cè)定
        4.7.2 陽性雜交瘤細(xì)胞的篩選及亞克隆
    4.8 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃曲霉毒素B1的檢測(cè)方法[J]. 馬江媛,桑曉霞,黃登宇.  食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2019(24)
[2]開放式三明治酶聯(lián)免疫分析及其在疾病標(biāo)志物檢測(cè)上的研究進(jìn)展[J]. 張麗倩,董航,叢楊,黃小明,付紅,茹爍,董金華.  標(biāo)記免疫分析與臨床. 2019(09)
[3]5-氟尿嘧啶及其衍生物抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J]. 晁艷紅,楊廣建,齊麗娟,潘靜,楊春潔,孫永琨.  癌癥進(jìn)展. 2019(01)
[4]酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)在水環(huán)境雌激素快速篩選中的應(yīng)用研究[J]. 胡雙慶,沈根祥,朱江,張洪渠,劉勇弟.  上海師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2011(06)
[5]半抗原的設(shè)計(jì)、修飾及人工抗原的制備[J]. 宋娟,王榕妹,王悅秋,唐雨榕,鄧安平.  分析化學(xué). 2010(08)
[6]基因工程抗體研究進(jìn)展[J]. 李菁,林彤,宋帥,高閃電,邵軍軍,叢國(guó)政,獨(dú)軍政,�；菔|.  生物技術(shù)通報(bào). 2009(10)
[7]含直鏈烷酸功能基的5-氟尿嘧啶衍生物的合成[J]. 許劉華,翁玲玲,鄭虎.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2006(04)
[8]免疫分析新方法在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 李興霞,王國(guó)霞,潘家榮.  生物技術(shù)通報(bào). 2006(01)
[9]Design, Synthesis and Investigation of Bone Affinity of the Conjugates of 5-Fluorouracil and Hydroxybisphosphonate[J]. Liu Hua XU, Hu ZHENG, Ling Ling WENG West China School of Pharmacy, Sichuan University, Chengdu 610041.  Chinese Chemical Letters. 2005(11)
[10]5-氟尿嘧啶-1-基乙酸合成方法的改進(jìn)[J]. 扈靖,劉彥欽,韓士田.  化學(xué)試劑. 2005(08)

碩士論文
[1]不同采摘時(shí)期山刺玫葉總黃酮的提取純化及其生理活性研究[D]. 丁婷婷.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]銀屑病患者血漿中CGRP1、VIP水平及與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性研究[D]. 王薇.承德醫(yī)學(xué)院 2019
[3]兔抗GCET2單克隆抗體的制備及其在DLBCL診斷中的應(yīng)用[D]. 潘紅陽.浙江大學(xué) 2016
[4]三聚氰胺、沙丁胺醇及苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）的研究和應(yīng)用[D]. 曹碧云.蘇州大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3315727