納豆激酶是納豆芽孢桿菌產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶,于日本納豆食品中發(fā)現(xiàn)的。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),納豆激酶具有溶解血栓的功能,可作為治療和預防血栓性疾病藥物。本研究是從日本進口納豆食品中篩選到一株納豆激酶活性高的菌株,采用紫外誘變篩選出突變株并提高酶活大小,并對突變株進行發(fā)酵工藝優(yōu)化,為以后納豆激酶工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。研究內容和結果如下:本試驗使用酪蛋白平板初篩,纖維蛋白平板進行復篩,從日本北海道生產(chǎn)的納豆食品最終篩選到了5株產(chǎn)納豆激酶的菌株,其中菌株XD2的酶活最高,為989.3 U/mL。對菌株進行16S rDNA分子鑒定,菌株XD2與枯草芽孢桿菌同源性達99%。結合系統(tǒng)進化樹確定菌株XD2是枯草芽孢桿菌。以原始菌株XD2為出發(fā)菌株,通過紫外誘變,根據(jù)酶活大小篩選突變菌株。確定了最佳紫外照射時間為150 s,致死率為84.09%。在該條件下篩選到6株菌株,其中突變株XD7的酶活最高,達到1137.15 U/mL。相比于原始菌株XD2,酶活提高了15%。對其進行了5次傳代,酶活變化不大,說明其遺傳穩(wěn)定性。從發(fā)酵曲線看出納豆激酶是生長關聯(lián)性代謝產(chǎn)物,綜合分析確定后續(xù)發(fā)酵時間為48 h。以突變株XD7為... 

【文章來源】：武漢工程大學湖北省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

凝血的過程

圖 2-1 尿激酶標準曲線Fig.2-1 Standard curve of urokinase由圖2-1所示，尿激酶標準曲線的線性方程為y=2.0849x-616.25，R2=99.84,說明尿激酶酶活大小與透明圈面積呈線性關系。2.3.3 菌株 XD2 的酶活結果表 2-4 菌株 XD2 酶活大小Table 2-4 The enzyme activity of strain XD2菌株編號 透明圈直徑/mm 酶活（U/mL）XD2 27.75 989.3由表 2-4 可知，根據(jù)尿激酶標準曲線，得到菌株 XD2 酶活大小為 989.3 U/mL。

圖 2-2 菌落 XD2 形態(tài)特征Fig.2-2 Morphological characteristics of XD2 2-2 所示，菌落的外形是近似圓形，顏色為白色或乳白扁平，邊緣不整齊，形狀為褶皺狀，中間有凸起，像火明。株 XD2 的分子生物學鑒定 XD2 PCR 產(chǎn)物電泳結果如圖 2.3 所示。其中 M 表0 DNAMarker，1、2、3 和 4 都是菌株 XD2 PCR 產(chǎn)物。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3295842