納豆激酶是納豆芽孢桿菌產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶,于日本納豆食品中發(fā)現(xiàn)的。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),納豆激酶具有溶解血栓的功能,可作為治療和預(yù)防血栓性疾病藥物。本研究是從日本進(jìn)口納豆食品中篩選到一株納豆激酶活性高的菌株,采用紫外誘變篩選出突變株并提高酶活大小,并對(duì)突變株進(jìn)行發(fā)酵工藝優(yōu)化,為以后納豆激酶工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:本試驗(yàn)使用酪蛋白平板初篩,纖維蛋白平板進(jìn)行復(fù)篩,從日本北海道生產(chǎn)的納豆食品最終篩選到了5株產(chǎn)納豆激酶的菌株,其中菌株XD2的酶活最高,為989.3 U/mL。對(duì)菌株進(jìn)行16S rDNA分子鑒定,菌株XD2與枯草芽孢桿菌同源性達(dá)99%。結(jié)合系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)確定菌株XD2是枯草芽孢桿菌。以原始菌株XD2為出發(fā)菌株,通過(guò)紫外誘變,根據(jù)酶活大小篩選突變菌株。確定了最佳紫外照射時(shí)間為150 s,致死率為84.09%。在該條件下篩選到6株菌株,其中突變株XD7的酶活最高,達(dá)到1137.15 U/mL。相比于原始菌株XD2,酶活提高了15%。對(duì)其進(jìn)行了5次傳代,酶活變化不大,說(shuō)明其遺傳穩(wěn)定性。從發(fā)酵曲線看出納豆激酶是生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)性代謝產(chǎn)物,綜合分析確定后續(xù)發(fā)酵時(shí)間為48 h。以突變株XD7為... 

【文章來(lái)源】：武漢工程大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

凝血的過(guò)程

圖 2-1 尿激酶標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-1 Standard curve of urokinase由圖2-1所示，尿激酶標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程為y=2.0849x-616.25，R2=99.84,說(shuō)明尿激酶酶活大小與透明圈面積呈線性關(guān)系。2.3.3 菌株 XD2 的酶活結(jié)果表 2-4 菌株 XD2 酶活大小Table 2-4 The enzyme activity of strain XD2菌株編號(hào) 透明圈直徑/mm 酶活（U/mL）XD2 27.75 989.3由表 2-4 可知，根據(jù)尿激酶標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到菌株 XD2 酶活大小為 989.3 U/mL。

圖 2-2 菌落 XD2 形態(tài)特征Fig.2-2 Morphological characteristics of XD2 2-2 所示，菌落的外形是近似圓形，顏色為白色或乳白扁平，邊緣不整齊，形狀為褶皺狀，中間有凸起，像火明。株 XD2 的分子生物學(xué)鑒定 XD2 PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖 2.3 所示。其中 M 表0 DNAMarker，1、2、3 和 4 都是菌株 XD2 PCR 產(chǎn)物。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]納豆固態(tài)發(fā)酵及納豆激酶分離純化應(yīng)用研究[D]. 黃婷.武漢輕工大學(xué) 2016
[3]納豆桿菌誘變選育及風(fēng)味納豆工藝研究[D]. 甄珍.齊齊哈爾大學(xué) 2015
[4]溶栓酶活性檢測(cè)方法的比較研究及高效溶栓菌株的篩選[D]. 邵榮軍.重慶師范大學(xué) 2012
[5]枯草芽孢桿菌纖溶酶高產(chǎn)菌株選育、發(fā)酵條件優(yōu)化及其分離純化[D]. 高宏.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[6]納豆激酶的分離純化和酶學(xué)性質(zhì)的研究[D]. 高大海.浙江大學(xué) 2005



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