基于新型標(biāo)記物及異源競(jìng)爭(zhēng)系統(tǒng)提高免疫學(xué)分析方法靈敏度的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-06-24 04:57
免疫學(xué)分析方法因其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在檢測(cè)領(lǐng)域備受關(guān)注。側(cè)向流動(dòng)免疫層析法(Lateral flow immunochromatography,LFI)和酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)作為免疫學(xué)分析中最常用且發(fā)展最為成熟的兩大篩查平臺(tái),因其簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)且成本低等優(yōu)勢(shì)被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)控以及食品安全檢測(cè)等領(lǐng)域。然而,這兩種免疫學(xué)分析方法的最大局限在于其檢測(cè)靈敏度偏低,無法對(duì)微量及痕量目標(biāo)物進(jìn)行準(zhǔn)確的定性及定量分析,難以滿足某些實(shí)際應(yīng)用的需求。如何提高這兩種免疫學(xué)分析方法的靈敏度已成為當(dāng)前亟待解決的主要問題。既往研究表明尋找新型標(biāo)記物以及優(yōu)化抗原(Antigen,Ag)與單克隆抗體(Monoclonal antibody,mAb)親和力是提高LFI和ELISA靈敏度的有效途徑,本研究探討了新型標(biāo)記物及異源競(jìng)爭(zhēng)系統(tǒng)提高檢測(cè)靈敏度的可行性,從而拓寬了其在超靈敏檢測(cè)中的應(yīng)用范圍。第一章緒論對(duì)包括LFI和ELISA在內(nèi)的免疫學(xué)分析方法系統(tǒng)地進(jìn)行了介紹;對(duì)本研究中所涉及到的喹諾酮類(FQs)及磺胺類(SAs)藥物進(jìn)行了分述,...
【文章來源】:南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:169 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2.1時(shí)間分辨熒光LFI檢測(cè)生牛乳中SMZ原理閣??Figure?2.1?Schematic?of?EuNP-LFI?for?detection?of?SMZ?in?raw?milk??37??
光免疫層析法超靈敏檢測(cè)生牛乳中磺胺二甲基嘧啶殘留??2.01???p?-?-?SMZ??BSA??16_?/?SMZ-DZ-BSA???SMZ-GA-BSA??S?1-2-/??c?/?^?\??CO?/?'??1?;?\?\??蘭?0.8-?、?\??<?,'??,?'?\??,?'??0.4-?^?'??\?????〇〇J?r-—??n??—??300?400?500?600??Wavelength?(nm)??圖2.3兩種檢測(cè)抗原的紫外表征圖??Figure?2.3?The?UV-vis?spectrum?of?two?detective?antigens??2.3.3抗體與兩種檢測(cè)抗原的親和力??生物膜層干涉是一種能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)抗原抗體相互作用的技術(shù),且不需要酶、??熒光物質(zhì)或放射性物質(zhì)等標(biāo)記物的參與。檢測(cè)過程中,抗體會(huì)與AMC傳感器表??面的Fc片段形成一層生物膜;當(dāng)抗原與抗體反應(yīng)時(shí),該生物膜層的厚度會(huì)發(fā)生??改變[116]。儀器通過獲取反應(yīng)前后生物膜層厚度的改變值以及預(yù)先輸入的反應(yīng)體??系濃度,在內(nèi)置數(shù)據(jù)處理軟件的輔助下計(jì)算出抗原抗體之間的結(jié)合常數(shù)、解離常??數(shù)及親和力常數(shù)。由圖2.5所示,抗體與SMZ-DZ-BSA和SMZ-GA-BSA的親和??力常數(shù)分別為3.875X10-9和3.214xl〇-5?M。由于抗體是由SMZ-DZ-BSA作為免??疫原制備而來,因此兩者的親和力較大。SMZ與BSA通過戊二醛法共價(jià)偶聯(lián)制??備的SMZ-GA-BSA,由于連接臂的差異,導(dǎo)致SMZ-DZ-BSA和SMZ-GA-BSA??的抗原決定簇處產(chǎn)生差異。BL1
65?220?276?330?385?440?49?S?550??Size?(d.nm)??C?1-°1?|?【)私?j??K?0.8-??|?^?22-??。埃叮?f??I?I?0????〇.4-?l??I?2?I-22-??札,,?>?一,—?一,??0.0?J?■■■■?■■■?■■■?—??????\?\?\?\?\?\?、、、、、、??\?\?\?\?\?'??々?^?^?%?々?^?4?%?%??圖2.4EuNP與EuNP-mAb的表征:(A)?EuNP的透射電鏡圖;(B)動(dòng)態(tài)光散射監(jiān)測(cè)EuNP??與?EuNP-mAb?的水化粒徑;(C)?EuNP?與?EuNP-mAb?的?PDI;?(D)?EuNP?與?EuNP-mAb?的??Zeta電位。??Figure?2.4?Characterization?of?EuNP?and?EuNP-mAb?complexes.?(A)?TEM?image?of?EuNP.?(B)??Size?characterization?of?EuNP?and?EuNP-mAb?complexes?by?dynamic?light?scattering.?(C)?PDI?of??EuNP?and?EuNP-mAb?complexes.?(D)?Zeta?potential?of?EuNP?before?and?after?coupling?with??mAb.??45??
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]新中國成立70周年食品安全演進(jìn)、特征與愿景[J]. 張蓓,馬如秋,劉凱明. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版). 2020(01)
[2]食品安全問題和食品檢測(cè)的發(fā)展及優(yōu)化[J]. 孫正宏,王娟. 現(xiàn)代食品. 2019(24)
[3]超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中氟喹諾酮類藥物[J]. 張夢(mèng)雪,劉松雁,王志恒,高慶輝,劉冰,張瓊. 今日畜牧獸醫(yī). 2019(12)
[4]肉制品中磺胺類藥物殘留危害及檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 危夢(mèng),王衛(wèi),雷英杰,陳泓帆,劉文龍. 中國調(diào)味品. 2019(12)
[5]食品安全免疫層析檢測(cè)技術(shù)研發(fā)及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 王忠興,郭玲玲,匡華. 生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2019(04)
[6]禽肉中磺胺藥物殘留分析及其累積性膳食暴露評(píng)估[J]. 曹愛巧,羅燕,丁艷玲,胡祥娜. 國外畜牧學(xué)(豬與禽). 2019(06)
[7]液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在磺胺類藥物殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 李翠萍. 食品安全導(dǎo)刊. 2019(06)
[8]HPLC-Q-TOF/MS法同時(shí)測(cè)定漁用飼料中磺胺類和喹諾酮類藥物殘留[J]. 柯慶青,李詩言,貝亦江,周凡,鄭重鶯,王鼎南,丁雪燕,王揚(yáng). 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(01)
[9]動(dòng)物源性食品檢測(cè)磺胺類殘留ELISA試劑盒的研制[J]. 謝體波,龔維瑤,鐘新敏,吳紫潔,程茹,張凱,袁光宇. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2018(12)
[10]酶聯(lián)免疫法測(cè)定肌肉中氟喹諾酮類藥物效果探討[J]. 李建鯤,俞成山,劉冬梅,劉曉蓉. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2018(13)
博士論文
[1]提高免疫學(xué)檢測(cè)靈敏度的新型信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)研究[D]. 黃小林.南昌大學(xué) 2018
[2]食品中真菌毒素抗體制備及其快速檢測(cè)方法研究[D]. 孔德昭.江南大學(xué) 2017
[3]四類重要抗生素殘留的免疫快速檢測(cè)方法的研究[D]. 陳燕妮.江南大學(xué) 2017
[4]量子點(diǎn)和金納米顆粒的生物標(biāo)志物體外檢測(cè)方法的構(gòu)建[D]. 武玉東.天津大學(xué) 2017
[5]三類重要漁藥殘留免疫快速檢測(cè)技術(shù)[D]. 彭娟.江南大學(xué) 2017
[6]黃曲霉毒素納米抗體研制及其免疫分析技術(shù)研究[D]. 何婷.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[7]氟喹諾酮類藥物多殘留免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 邢廣旭.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
碩士論文
[1]五種肉類基質(zhì)對(duì)磺胺二甲基嘧啶膠體金免疫層析法的影響及雞肉前處理方法的研究[D]. 劉娜梅.南昌大學(xué) 2018
[2]具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光和壓致變色性質(zhì)的磷光金屬銥配合物的合成及其應(yīng)用[D]. 蔣洋.東北師范大學(xué) 2018
[3]肉雞組織中氟喹諾酮類抗生素快速檢測(cè)的膠體金技術(shù)研究[D]. 孫曉崢.河北工程大學(xué) 2018
[4]牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)納米抗體生物學(xué)特性研究及ELISA檢測(cè)方法的建立[D]. 丁金花.石河子大學(xué) 2017
[5]免疫層析定量檢測(cè)氟苯尼考和萊克多巴胺的研究[D]. 胡莉明.南昌大學(xué) 2017
[6]糧油中真菌毒素量子點(diǎn)納米球同步檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 歐陽歲燕.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[7]獸藥及非法添加物量子點(diǎn)標(biāo)記檢測(cè)試紙條研制[D]. 孔智輝.天津科技大學(xué) 2017
[8]用于食品安全檢測(cè)的上轉(zhuǎn)換熒光試紙條檢測(cè)儀的設(shè)計(jì)[D]. 趙翔.河北工業(yè)大學(xué) 2016
[9]?墒承越M織25種喹諾酮類藥物L(fēng)C-MS/MS檢測(cè)方法研究[D]. 權(quán)丹.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[10]熒光免疫層析法快速定量檢測(cè)前白蛋白和骨特異性堿性磷酸酶[D]. 楊亞杰.南昌大學(xué) 2016
本文編號(hào):3246414
【文章來源】:南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:169 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2.1時(shí)間分辨熒光LFI檢測(cè)生牛乳中SMZ原理閣??Figure?2.1?Schematic?of?EuNP-LFI?for?detection?of?SMZ?in?raw?milk??37??
光免疫層析法超靈敏檢測(cè)生牛乳中磺胺二甲基嘧啶殘留??2.01???p?-?-?SMZ??BSA??16_?/?SMZ-DZ-BSA???SMZ-GA-BSA??S?1-2-/??c?/?^?\??CO?/?'??1?;?\?\??蘭?0.8-?、?\??<?,'??,?'?\??,?'??0.4-?^?'??\?????〇〇J?r-—??n??—??300?400?500?600??Wavelength?(nm)??圖2.3兩種檢測(cè)抗原的紫外表征圖??Figure?2.3?The?UV-vis?spectrum?of?two?detective?antigens??2.3.3抗體與兩種檢測(cè)抗原的親和力??生物膜層干涉是一種能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)抗原抗體相互作用的技術(shù),且不需要酶、??熒光物質(zhì)或放射性物質(zhì)等標(biāo)記物的參與。檢測(cè)過程中,抗體會(huì)與AMC傳感器表??面的Fc片段形成一層生物膜;當(dāng)抗原與抗體反應(yīng)時(shí),該生物膜層的厚度會(huì)發(fā)生??改變[116]。儀器通過獲取反應(yīng)前后生物膜層厚度的改變值以及預(yù)先輸入的反應(yīng)體??系濃度,在內(nèi)置數(shù)據(jù)處理軟件的輔助下計(jì)算出抗原抗體之間的結(jié)合常數(shù)、解離常??數(shù)及親和力常數(shù)。由圖2.5所示,抗體與SMZ-DZ-BSA和SMZ-GA-BSA的親和??力常數(shù)分別為3.875X10-9和3.214xl〇-5?M。由于抗體是由SMZ-DZ-BSA作為免??疫原制備而來,因此兩者的親和力較大。SMZ與BSA通過戊二醛法共價(jià)偶聯(lián)制??備的SMZ-GA-BSA,由于連接臂的差異,導(dǎo)致SMZ-DZ-BSA和SMZ-GA-BSA??的抗原決定簇處產(chǎn)生差異。BL1
65?220?276?330?385?440?49?S?550??Size?(d.nm)??C?1-°1?|?【)私?j??K?0.8-??|?^?22-??。埃叮?f??I?I?0????〇.4-?l??I?2?I-22-??札,,?>?一,—?一,??0.0?J?■■■■?■■■?■■■?—??????\?\?\?\?\?\?、、、、、、??\?\?\?\?\?'??々?^?^?%?々?^?4?%?%??圖2.4EuNP與EuNP-mAb的表征:(A)?EuNP的透射電鏡圖;(B)動(dòng)態(tài)光散射監(jiān)測(cè)EuNP??與?EuNP-mAb?的水化粒徑;(C)?EuNP?與?EuNP-mAb?的?PDI;?(D)?EuNP?與?EuNP-mAb?的??Zeta電位。??Figure?2.4?Characterization?of?EuNP?and?EuNP-mAb?complexes.?(A)?TEM?image?of?EuNP.?(B)??Size?characterization?of?EuNP?and?EuNP-mAb?complexes?by?dynamic?light?scattering.?(C)?PDI?of??EuNP?and?EuNP-mAb?complexes.?(D)?Zeta?potential?of?EuNP?before?and?after?coupling?with??mAb.??45??
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]新中國成立70周年食品安全演進(jìn)、特征與愿景[J]. 張蓓,馬如秋,劉凱明. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版). 2020(01)
[2]食品安全問題和食品檢測(cè)的發(fā)展及優(yōu)化[J]. 孫正宏,王娟. 現(xiàn)代食品. 2019(24)
[3]超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中氟喹諾酮類藥物[J]. 張夢(mèng)雪,劉松雁,王志恒,高慶輝,劉冰,張瓊. 今日畜牧獸醫(yī). 2019(12)
[4]肉制品中磺胺類藥物殘留危害及檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 危夢(mèng),王衛(wèi),雷英杰,陳泓帆,劉文龍. 中國調(diào)味品. 2019(12)
[5]食品安全免疫層析檢測(cè)技術(shù)研發(fā)及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 王忠興,郭玲玲,匡華. 生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2019(04)
[6]禽肉中磺胺藥物殘留分析及其累積性膳食暴露評(píng)估[J]. 曹愛巧,羅燕,丁艷玲,胡祥娜. 國外畜牧學(xué)(豬與禽). 2019(06)
[7]液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在磺胺類藥物殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 李翠萍. 食品安全導(dǎo)刊. 2019(06)
[8]HPLC-Q-TOF/MS法同時(shí)測(cè)定漁用飼料中磺胺類和喹諾酮類藥物殘留[J]. 柯慶青,李詩言,貝亦江,周凡,鄭重鶯,王鼎南,丁雪燕,王揚(yáng). 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(01)
[9]動(dòng)物源性食品檢測(cè)磺胺類殘留ELISA試劑盒的研制[J]. 謝體波,龔維瑤,鐘新敏,吳紫潔,程茹,張凱,袁光宇. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2018(12)
[10]酶聯(lián)免疫法測(cè)定肌肉中氟喹諾酮類藥物效果探討[J]. 李建鯤,俞成山,劉冬梅,劉曉蓉. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2018(13)
博士論文
[1]提高免疫學(xué)檢測(cè)靈敏度的新型信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)研究[D]. 黃小林.南昌大學(xué) 2018
[2]食品中真菌毒素抗體制備及其快速檢測(cè)方法研究[D]. 孔德昭.江南大學(xué) 2017
[3]四類重要抗生素殘留的免疫快速檢測(cè)方法的研究[D]. 陳燕妮.江南大學(xué) 2017
[4]量子點(diǎn)和金納米顆粒的生物標(biāo)志物體外檢測(cè)方法的構(gòu)建[D]. 武玉東.天津大學(xué) 2017
[5]三類重要漁藥殘留免疫快速檢測(cè)技術(shù)[D]. 彭娟.江南大學(xué) 2017
[6]黃曲霉毒素納米抗體研制及其免疫分析技術(shù)研究[D]. 何婷.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[7]氟喹諾酮類藥物多殘留免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 邢廣旭.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
碩士論文
[1]五種肉類基質(zhì)對(duì)磺胺二甲基嘧啶膠體金免疫層析法的影響及雞肉前處理方法的研究[D]. 劉娜梅.南昌大學(xué) 2018
[2]具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光和壓致變色性質(zhì)的磷光金屬銥配合物的合成及其應(yīng)用[D]. 蔣洋.東北師范大學(xué) 2018
[3]肉雞組織中氟喹諾酮類抗生素快速檢測(cè)的膠體金技術(shù)研究[D]. 孫曉崢.河北工程大學(xué) 2018
[4]牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)納米抗體生物學(xué)特性研究及ELISA檢測(cè)方法的建立[D]. 丁金花.石河子大學(xué) 2017
[5]免疫層析定量檢測(cè)氟苯尼考和萊克多巴胺的研究[D]. 胡莉明.南昌大學(xué) 2017
[6]糧油中真菌毒素量子點(diǎn)納米球同步檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 歐陽歲燕.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[7]獸藥及非法添加物量子點(diǎn)標(biāo)記檢測(cè)試紙條研制[D]. 孔智輝.天津科技大學(xué) 2017
[8]用于食品安全檢測(cè)的上轉(zhuǎn)換熒光試紙條檢測(cè)儀的設(shè)計(jì)[D]. 趙翔.河北工業(yè)大學(xué) 2016
[9]?墒承越M織25種喹諾酮類藥物L(fēng)C-MS/MS檢測(cè)方法研究[D]. 權(quán)丹.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[10]熒光免疫層析法快速定量檢測(cè)前白蛋白和骨特異性堿性磷酸酶[D]. 楊亞杰.南昌大學(xué) 2016
本文編號(hào):3246414
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