酸性蛋白酶是一類在酸性條件下具有水解活性的蛋白酶,由于其活性中心有兩個天冬氨酸基團,因此也稱為天冬氨酸蛋白酶。酸性蛋白酶能在酸性條件下高效水解蛋白,廣泛應(yīng)用于食品生產(chǎn)、飼料生產(chǎn)、皮毛與皮革加工、醫(yī)藥等行業(yè),具有良好的工業(yè)應(yīng)用前景。本研究克隆了假灰綠曲霉（Aspergillus pseudoglaucus）酸性蛋白酶AspergillopepsinⅠ成熟肽基因和帶有前導(dǎo)肽的成熟肽基因,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒,于大腸桿菌（Escherichia.coli BL21）中表達,結(jié)果表明前導(dǎo)肽對蛋白的表達具有重要影響。研究了不同的表達載體和不同來源的前導(dǎo)肽對酸性蛋白酶表達與功能的影響,考察了重組酸性蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì),優(yōu)化了其水解大豆蛋白和乳蛋白的條件,為微生物酸性蛋白酶的理論研究和工業(yè)應(yīng)用提供了較好的研究基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容包括:（1）以合成得到的A.pseudoglaucus酸性蛋白酶AspergillopepsinⅠ全基因為模板克隆獲取成熟肽基因（App）和帶有前導(dǎo)肽的酸性蛋白酶基因（proApp）,同時通過重疊延伸PCR方法將Candida tropicalis的Candidapepsin的前導(dǎo)肽... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同的微生物酸性蛋白酶的氨基酸序列比對Fig.1-1SequencealignmentofacidicproteasesfromdifferentmicroorganismsXP_001401093.1,ProteaseBofA.niger;pdb|1BXO|A,AcidproteinasefromP.janthinellum;pdb|1IZE|A,AsparticproteinasefromA.oryze;ACL68091.1,Rhizopuspepsin4fromR.oryzae;prf

表 1-1 不同的微生物酸性蛋白酶的最適反應(yīng)條件和穩(wěn)定性比較parison of optimum reaction conditions and stability of acidic proteases from白酶來源 最適反應(yīng)溫度（°C）最適反應(yīng)pH溫度穩(wěn)定范圍（°C）pH 穩(wěn)定范圍clavatus 50 5.5 45–55 3.5–6.5zae (MTCC 55 3.2 40–57 2.5–6.0awachii 50 3.0 25 3.0–4.0nnebergii 50 4.0 30–60 3.0–5.0 oryzae 60 5.5 30–45 5.5–7.5zae LK-101 50 6.5 20–40 4.5–7.5sus pilosus 55 2.5–3.0 25–55 2.5–6.0射線晶體學(xué)分析各種天冬氨酸蛋白酶，結(jié)果顯示它們的活性位有催化活性天冬氨酸殘基（圖 1-2），因此抑制劑通過酯化到抑制效果。


本文編號：3245738