血栓栓塞類疾病的發(fā)病率近年來不斷上升。利用纖溶酶溶解是血栓栓塞類疾病治療的重要方法,而微生物是非常重要的纖溶酶來源,且具有種類多、易于培養(yǎng)、繁殖快,人們的提取工藝也較為成熟的優(yōu)點(diǎn)。乳酸菌廣泛存在于發(fā)酵食品中,并且大多數(shù)乳酸菌是腸道內(nèi)的有益微生物。因此,從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中篩選產(chǎn)纖溶酶的乳酸菌,并對(duì)其產(chǎn)生的纖溶酶進(jìn)行研究,對(duì)開發(fā)預(yù)防血栓栓塞類疾病的保健食品具有重要的意義。本研究從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中分離篩選產(chǎn)溶纖酶的乳酸菌,對(duì)其進(jìn)行形態(tài)特征、生理生化特征、16S rDNA基因序列綜合鑒定,以確定菌株的種屬;對(duì)目的菌株進(jìn)行安全性的初步評(píng)估,選取安全的菌株進(jìn)行后續(xù)研究。進(jìn)行菌株的基本生物學(xué)特性的研究;對(duì)菌株所產(chǎn)的纖溶酶進(jìn)行分離純化,并對(duì)酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究;采用響應(yīng)面的方法對(duì)該菌株進(jìn)行產(chǎn)酶條件優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下:（1）從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中經(jīng)初篩、纖維蛋白平板復(fù)篩,篩選出2株溶解纖維蛋白的菌株,分別命名為HYD09和HYN06。測(cè)定兩株菌的發(fā)酵上清液酶活,其分別是115.3 U/mL和107.2 U/mL。根據(jù)菌株菌體特征、菌落特征、生理生化特征和16S rDNA序列比對(duì)結(jié)果,判定兩株菌均為糞腸球菌（Ent... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

纖維蛋白平板復(fù)篩圖

1：1號(hào)菌株發(fā)酵上清液；2：2號(hào)菌株發(fā)酵上清液；3：3號(hào)菌株發(fā)酵上清液；4：4號(hào)菌株發(fā)酵上清液；5：5號(hào)菌株發(fā)酵上清液；6：6號(hào)菌株發(fā)酵上清液；7：7號(hào)菌株發(fā)酵上清液；8：8號(hào)菌株發(fā)酵上清液；9：9號(hào)菌株發(fā)酵上清液。3.1.2 纖溶活性的測(cè)定分別取 31.25，62.5，125，250，500 U/mL 尿激酶標(biāo)準(zhǔn)品 20 μL 點(diǎn)樣于纖維蛋白平板，37 ℃培養(yǎng) 18 h，測(cè)定溶解圈的垂直直徑。以標(biāo)準(zhǔn)尿激酶濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，解圈面積的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)作圖，如圖 3。由圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y=0.3409x-0.412相關(guān)系數(shù) R2=0.9991。說明此標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，可用于后續(xù)酶活的測(cè)定。

.1.3.2 生理生化鑒定參照《乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》[85]以及《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[86]YD09 和菌株 HYN06 進(jìn)行生理生化鑒定，結(jié)果如表 11。表 11 細(xì)菌生理生化特征 Table 11 Physiological and biochemical characters特征 HYD09 HYN06 特征 HYD09 HYN運(yùn)動(dòng)性 - - 蜜二糖 - -精氨酸雙水解酶 + + 棉子糖 - -葡萄糖- - 山梨糖 - -葡萄糖酸鹽 + 乳糖 + +L-阿拉伯糖 半乳糖 + +D-阿拉伯糖醇 - - 10 ℃ 生長(zhǎng) 生圖 4 菌株 HYD09 的菌落形態(tài)Fig.4 The colony morphology ofstrain HYD09圖 5 菌株 HYD09 的革蘭氏鏡檢結(jié)果Fig.5 Results of the gram-microscopic examof the strain HYD09

【參考文獻(xiàn)】：
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