藥食用真菌以其獨(dú)特的天然活性和藥用價(jià)值越來越被科研工作者所重視,尤其昆蟲寄生真菌如冬蟲夏草、蛹蟲草等已被研究證明具有極高的藥用價(jià)值。白蟻球菌Fibularhizoctonia sp.是在圓唇散白蟻巢穴中發(fā)現(xiàn)的共生真菌,前期研究發(fā)現(xiàn)其菌絲體生長繁殖能力強(qiáng)、產(chǎn)量高,富含三萜類化合物和真菌多糖等生物活性物質(zhì),在真菌資源可利用方面,具有非常好的開發(fā)前景。本論文主要針對(duì)白蟻球菌的退化與復(fù)壯、菌絲體安全性和活性物質(zhì),開展白蟻球菌在擴(kuò)大培養(yǎng)中質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)和潛在藥食用價(jià)值方面的研究,以期為白蟻球菌未來的開發(fā)提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:（1）菌株復(fù)壯。為保持菌種的優(yōu)良性狀,通過對(duì)不同傳代次數(shù)菌株質(zhì)量的顯微檢測(cè),制定了其優(yōu)良性狀的觀察指標(biāo)和保藏方法,菌絲結(jié)構(gòu)粗壯強(qiáng)健、菌絲潔白、分枝繁茂具有良好擴(kuò)散活性即可作為傳代和保藏的母株,而且要嚴(yán)格控制傳代次數(shù)在3代以內(nèi),當(dāng)發(fā)生退化老化現(xiàn)象時(shí)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)篩選,可通過改良的尖端分離復(fù)壯技術(shù)篩選保持原有繁殖能力的菌株。（2）菌絲體安全性。急性毒性試驗(yàn)表明,雌雄大鼠未有死亡,試驗(yàn)動(dòng)物解剖顯示各器官未出現(xiàn)明顯的病理性變化雌雄大鼠經(jīng)口最大耐受劑量（MTD）灌胃,顯示該菌絲... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

第二章白蟻球菌的生殖方式及復(fù)壯培養(yǎng)19圖2-1不同傳代次數(shù)的菌核形態(tài)Fig.2-1Sclerotiamorphologyatdifferentpassages附注1：圖A為原始正常菌核形狀，圖B為第3代轉(zhuǎn)接后成熟菌核形狀，圖C、D分別為第4和第5代轉(zhuǎn)接后成熟的菌核形狀。2.4.2菌種的生殖方式掃描電鏡下我們觀察其菌絲體特征，發(fā)現(xiàn)液體培養(yǎng)條件下沒有產(chǎn)生孢子，也沒有產(chǎn)生孢子的孢子�；蜴咦幽�，因此我們推斷該菌絲體的生長是通過極化的方式進(jìn)行極性生長（polarizedgrowth），通過產(chǎn)生豐富的營養(yǎng)菌絲，依賴頂端的頂體（Spitzenkrper）等結(jié)構(gòu)進(jìn)行極性生長。目前，在實(shí)驗(yàn)室人工培養(yǎng)狀態(tài)下尚未發(fā)現(xiàn)該菌絲體有進(jìn)行其他方式的生長繁殖，但在圖2-2中B和D圖倍數(shù)下，我們可以清晰看到菌絲體明顯具有鎖狀聯(lián)合的突起結(jié)構(gòu)存在，具有雙核菌絲特征，與單核菌絲相比，它在基質(zhì)上生長速度更快、菌絲結(jié)構(gòu)更粗壯強(qiáng)艦分枝更加繁茂，是優(yōu)良遺傳性狀的表現(xiàn)，為其擴(kuò)大培養(yǎng)提供了生殖優(yōu)勢(shì)，同時(shí)雙核菌絲也是擔(dān)子菌類藥（食）用營養(yǎng)菌絲存在的主要形式。

西北大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖2-2掃描電鏡下的菌絲形態(tài)Fig.2-2Mycelialmorphologyunderscanningelectronmicroscope附注2：圖A-D為菌絲體在不同倍數(shù)下的場發(fā)射掃描電鏡圖2.4.3尖端分離復(fù)壯菌株長勢(shì)傳代培養(yǎng)至3代以后的菌株在固體培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)，菌絲日平均生長速度為0.43cm/d，遠(yuǎn)低于3代以前0.62cm/d的速度，菌核成熟期變?yōu)?2d以上，傳代次數(shù)越多生長越緩慢，甚至不再能全部形成成熟菌核；同時(shí)轉(zhuǎn)接至液體條件下培養(yǎng)時(shí)，干燥的純菌絲所得量由1.02g/80mL降低至0.56g/80mL及以下，菌絲體擴(kuò)大培養(yǎng)出現(xiàn)明顯下降。經(jīng)改良后的尖端分離復(fù)壯培養(yǎng)，篩選出的菌株恢復(fù)至0.55～0.62cm/d的生長速度，且液體培養(yǎng)純菌絲量平均可達(dá)到0.98g/80mL，繼續(xù)作為菌株母種保藏并進(jìn)行繁殖培養(yǎng)，但傳代次數(shù)應(yīng)當(dāng)控制于三代以內(nèi)。圖2-3為菌種篩選培養(yǎng)過程中菌絲在不同時(shí)間段內(nèi)的生長擴(kuò)散情況，在篩選過程中，我們將具有擴(kuò)散能力強(qiáng)的菌核及擴(kuò)散出的尖端菌絲大量轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)接的絕大部分菌絲生長繁殖旺盛，在13d時(shí)長滿固體培養(yǎng)基，但并不會(huì)成為成熟菌核，而是依舊具有擴(kuò)散能力，繼續(xù)分離培養(yǎng)時(shí)可再次形成圓球菌種菌核形態(tài)。

【參考文獻(xiàn)】：
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