胸腺基質淋巴細胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP）的表達分布廣泛,主要包括肺、皮膚和腸道屏障表面的上皮細胞等。呼吸道被過敏原或病原微生物刺激后,TSLP的表達會上調。TSLP可以促進DC細胞（樹突狀細胞）成熟。成熟的DC細胞會誘導過敏性哮喘�；蚪M學研究發(fā)現,TSLP是過敏性炎癥的相關位點。在小鼠過敏原誘導哮喘模型和靈長類過敏原誘導的哮喘模型中,已經證實胸腺基質淋巴細胞生成素在誘導過敏性哮喘中扮演了關鍵角色。本實驗構建了 TSLP及WM35-Fab（TSLP抗體）兩種瞬轉和穩(wěn)轉質粒,在瞬轉確認了 TSLP及WM35-Fab在293E中可順利表達后,我們構建TSLP及WM35-Fab穩(wěn)轉的CHO細胞株。為了便于純化,我們在TSLP及WM35-Fab蛋白C端連接組氨酸標簽。TSLP及WM35-Fab his標簽蛋白通過Ni柱親和層析和分子排阻色譜層析拿到了高純度蛋白。TSLP及WM35-Fab蛋白由于是穩(wěn)轉細胞株表達,均一性較高。我們嘗試不同孵育比例后,發(fā)現WM35-Fab:TSLP摩爾比在1:3時,W35-Fab/TSLP蛋白復合物孵育效果最好。... 

【文章來源】：北京化工大學北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：86 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１ＴＳＬＰ與哮喘的關系［２ＱＩ??Ｆｉｇ．?１－ｌＴｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＴＳＬＰ?ａｎｄ?ａｓｔｈｍａ?剛??

?第一章緒論???他雜質的分離。??１．２．２．１．１親和層析原理??ｅ的產物?�。荆�?□?〇??－－ｙｒｙ＾ｒｙｒｙ＊?＂＇?￣＇?????＼??介質??圖１－２親和層析的原理ｄ??Ｆｉｇ．１－２?Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?Ａｆｆｉｎｉｔｙ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?卩７］??蛋白親和層析技術利用柱子基質所偶聯的特殊蛋白或者分子與目的蛋白可以特??異性親和吸附這一生物特性，直接從成分復雜的上清培養(yǎng)液中捕獲目的蛋白一步純化??就可以得到高純度的目的蛋白。由于基質填料所偶聯的特殊蛋白或者分子與目的蛋白??具有高親和力，目的蛋白在成分復雜上清中即使?jié)舛群艿鸵部梢圆东@。??本實驗主要使用的是鎳離子純化柱。鎳離子純化柱主要原理：在目的蛋白序列的??Ｎ端或Ｃ端加上六個特定的肽段序列：ＨＨＨＨＨＨ，?ＨＨＨＨＨＨ又稱為ｈｉｓ標簽［３８］。鎳??柱基質上偶聯的鎳離子可以特異性的捕獲ｈｉｓ標簽，讓目的蛋白與培養(yǎng)液上清其他復??雜雜質分離。Ｎｉ２＋與ｈｉｓ標簽特異性結合原理：ｈｉｓ又稱組氨酸，組氨酸Ｒ基上是五元??雜環(huán)化合物，Ｒ基可以Ｎｉ２＋結合。咪唑的空間結構和組氨酸上的Ｒ基類似，也可以??Ｎｉ２＋結合［％。因為在鎳柱親和層析中選用咪唑作為流動相。蛋白純化上樣前通常在含??有Ｈｉｓ標簽的目的重組蛋白的培養(yǎng)上清中加入一定低濃度的咪唑，通常是２０ｍＭ，低??濃度的咪唑可以與培養(yǎng)上清中的無關雜質和Ｎｉ２＋的競爭性結合，避免雜質被鎳離子吸??附，從而獲得高純度的目的重組蛋白。??１．２．２．１．２親和層析標簽??在所有的親和標簽中，ｈｉｓ標簽最常用。Ｈｉｓ標簽具有很多有點，例如配體簡單，??７??

理??ｒ：??＿?＇、?１?Ｓｕｐｅｒｓａｔｕｒａｔ？ｏｎ?｜??－Ｙ?＼?．??１＊?＿?＼?＼Ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ?＼??？?＊?々、?Ｉ?ＳｉｉｐＰｆｓｒｆｕｈｉｌｉｆｖ??Ｍｅｔａｓｔａｂｌｅ?ｃｕｒｖｅ??一???１?、＇、？Ｉ?ｚｏｎｅ??［．２—＾?Ｔ?＾．?ｓｏｉｕｂｉｌｒｔｙｃｕｒｖｅ??ｉ?ｊ?｜?｛?｜?｜?＾??Ａｄｊｕｓｔａｂｌｅ?ｐａｒａｍｅｔｅｒ??ＯｊｒｒｅｒｔＯｐ＾ｒ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?８？３ｋ＾??圖１－３晶體結晶原理圖…】??Ｆｉｇ．ｌ－３Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｃｒ＼；ｓｔａｌ?ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ１４３１??圖１－３展示了一個經典的晶體結晶原理圖。蛋白結晶相圖一共可以根據不同區(qū)域??的飽和度不同而進行劃分為四個區(qū)域。在沉淀區(qū)，由于區(qū)域內蛋白處于極度過飽和狀??態(tài)，蛋白會自發(fā)形成沉淀，很低概率形成晶體；在成核區(qū)，由于蛋白濃度中度飽和，??晶體會自發(fā)形成晶核；在亞穩(wěn)態(tài)區(qū)，也是晶體形成區(qū)域。低飽和區(qū)蛋白會在己經形成??的晶核進行一定順序的堆疊，最終生長出晶體；不飽和區(qū)由于蛋白在此區(qū)域內和正常??９??

【參考文獻】：
碩士論文
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[4]親和層析技術的研究及應用[D]. 王桂珍.暨南大學 2011
[5]哮喘小鼠胸腺基質淋巴細胞生成素及其受體的表達以及布地奈德、卡介苗干預的影響[D]. 王淑麗.蘇州大學 2009
[6]胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）在鼻息肉的表達及意義[D]. 趙菲.山西醫(yī)科大學 2007



本文編號：3215683