胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP）的表達分布廣泛,主要包括肺、皮膚和腸道屏障表面的上皮細胞等。呼吸道被過敏原或病原微生物刺激后,TSLP的表達會上調(diào)。TSLP可以促進DC細胞（樹突狀細胞）成熟。成熟的DC細胞會誘導過敏性哮喘�；蚪M學研究發(fā)現(xiàn),TSLP是過敏性炎癥的相關位點。在小鼠過敏原誘導哮喘模型和靈長類過敏原誘導的哮喘模型中,已經(jīng)證實胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素在誘導過敏性哮喘中扮演了關鍵角色。本實驗構建了 TSLP及WM35-Fab（TSLP抗體）兩種瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒,在瞬轉(zhuǎn)確認了 TSLP及WM35-Fab在293E中可順利表達后,我們構建TSLP及WM35-Fab穩(wěn)轉(zhuǎn)的CHO細胞株。為了便于純化,我們在TSLP及WM35-Fab蛋白C端連接組氨酸標簽。TSLP及WM35-Fab his標簽蛋白通過Ni柱親和層析和分子排阻色譜層析拿到了高純度蛋白。TSLP及WM35-Fab蛋白由于是穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株表達,均一性較高。我們嘗試不同孵育比例后,發(fā)現(xiàn)WM35-Fab:TSLP摩爾比在1:3時,W35-Fab/TSLP蛋白復合物孵育效果最好。... 

【文章來源】：北京化工大學北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１ＴＳＬＰ與哮喘的關系［２ＱＩ??Ｆｉｇ．?１－ｌＴｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＴＳＬＰ?ａｎｄ?ａｓｔｈｍａ?剛??

?第一章緒論???他雜質(zhì)的分離。??１．２．２．１．１親和層析原理??ｅ的產(chǎn)物?！＞＾?□?〇??－－ｙｒｙ＾ｒｙｒｙ＊?＂＇?￣＇?????＼??介質(zhì)??圖１－２親和層析的原理ｄ??Ｆｉｇ．１－２?Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?Ａｆｆｉｎｉｔｙ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?卩７］??蛋白親和層析技術利用柱子基質(zhì)所偶聯(lián)的特殊蛋白或者分子與目的蛋白可以特??異性親和吸附這一生物特性，直接從成分復雜的上清培養(yǎng)液中捕獲目的蛋白一步純化??就可以得到高純度的目的蛋白。由于基質(zhì)填料所偶聯(lián)的特殊蛋白或者分子與目的蛋白??具有高親和力，目的蛋白在成分復雜上清中即使?jié)舛群艿鸵部梢圆东@。??本實驗主要使用的是鎳離子純化柱。鎳離子純化柱主要原理：在目的蛋白序列的??Ｎ端或Ｃ端加上六個特定的肽段序列：ＨＨＨＨＨＨ，?ＨＨＨＨＨＨ又稱為ｈｉｓ標簽［３８］。鎳??柱基質(zhì)上偶聯(lián)的鎳離子可以特異性的捕獲ｈｉｓ標簽，讓目的蛋白與培養(yǎng)液上清其他復??雜雜質(zhì)分離。Ｎｉ２＋與ｈｉｓ標簽特異性結合原理：ｈｉｓ又稱組氨酸，組氨酸Ｒ基上是五元??雜環(huán)化合物，Ｒ基可以Ｎｉ２＋結合。咪唑的空間結構和組氨酸上的Ｒ基類似，也可以??Ｎｉ２＋結合［％。因為在鎳柱親和層析中選用咪唑作為流動相。蛋白純化上樣前通常在含??有Ｈｉｓ標簽的目的重組蛋白的培養(yǎng)上清中加入一定低濃度的咪唑，通常是２０ｍＭ，低??濃度的咪唑可以與培養(yǎng)上清中的無關雜質(zhì)和Ｎｉ２＋的競爭性結合，避免雜質(zhì)被鎳離子吸??附，從而獲得高純度的目的重組蛋白。??１．２．２．１．２親和層析標簽??在所有的親和標簽中，ｈｉｓ標簽最常用。Ｈｉｓ標簽具有很多有點，例如配體簡單，??７??

理??ｒ：??＿?＇、?１?Ｓｕｐｅｒｓａｔｕｒａｔ？ｏｎ?｜??－Ｙ?＼?．??１＊?＿?＼?＼Ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ?＼??？?＊?々、?Ｉ?ＳｉｉｐＰｆｓｒｆｕｈｉｌｉｆｖ??Ｍｅｔａｓｔａｂｌｅ?ｃｕｒｖｅ??一???１?、＇、？Ｉ?ｚｏｎｅ??［．２—＾?Ｔ?＾．?ｓｏｉｕｂｉｌｒｔｙｃｕｒｖｅ??ｉ?ｊ?｜?｛?｜?｜?＾??Ａｄｊｕｓｔａｂｌｅ?ｐａｒａｍｅｔｅｒ??ＯｊｒｒｅｒｔＯｐ＾ｒ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?８？３ｋ＾??圖１－３晶體結晶原理圖…】??Ｆｉｇ．ｌ－３Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｃｒ＼；ｓｔａｌ?ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ１４３１??圖１－３展示了一個經(jīng)典的晶體結晶原理圖。蛋白結晶相圖一共可以根據(jù)不同區(qū)域??的飽和度不同而進行劃分為四個區(qū)域。在沉淀區(qū)，由于區(qū)域內(nèi)蛋白處于極度過飽和狀??態(tài)，蛋白會自發(fā)形成沉淀，很低概率形成晶體；在成核區(qū)，由于蛋白濃度中度飽和，??晶體會自發(fā)形成晶核；在亞穩(wěn)態(tài)區(qū)，也是晶體形成區(qū)域。低飽和區(qū)蛋白會在己經(jīng)形成??的晶核進行一定順序的堆疊，最終生長出晶體；不飽和區(qū)由于蛋白在此區(qū)域內(nèi)和正常??９??

【參考文獻】：
碩士論文
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[2]抗胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素（TSLP）全人源單鏈抗體的篩選及特性分析[D]. 朱建光.四川醫(yī)科大學 2015
[3]人胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素在特應性皮炎和濕疹發(fā)病機制中的作用[D]. 賈鑫璇.瀘州醫(yī)學院 2013
[4]親和層析技術的研究及應用[D]. 王桂珍.暨南大學 2011
[5]哮喘小鼠胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素及其受體的表達以及布地奈德、卡介苗干預的影響[D]. 王淑麗.蘇州大學 2009
[6]胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素（TSLP）在鼻息肉的表達及意義[D]. 趙菲.山西醫(yī)科大學 2007



本文編號：3215683