黃曲霉毒素B₁（Aflatoxin B₁,AFB₁）是一種天然的高毒性次級代謝產(chǎn)物,廣泛存在于自然界,易污染花生、玉米、大米等谷物,被世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機構(gòu)（IARC）劃定為Ⅰ類致癌物。AFB₁對人和家畜的健康安全都產(chǎn)生了極大的威脅,因此研究AFB₁的降解脫毒對食品和飼料加工工業(yè)具有重要意義。錳過氧化物酶（Manganese peroxidase,MnP）能夠裂解AFB₁呋喃環(huán)上的8,9位雙鍵,將AFB₁氧化生成AFB₁-8,9環(huán)氧化物,經(jīng)Mn P氧化產(chǎn)生的環(huán)氧化物會自發(fā)水解為AFB₁-8,9-二氫二醇,從而達到對AFB₁降解脫毒的目的。本文在食品級乳酸克魯維酵母（Kluyveromyces lactis）中實現(xiàn)了三種不同來源的錳過氧化物酶的分泌表達,并對降解AFB₁效果最優(yōu)的重組菌的誘導(dǎo)條件和反應(yīng)條件進行優(yōu)化,從而實現(xiàn)直接利用其發(fā)酵液高效降解... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮寫詞對照表
1 緒論
    1.1 黃曲霉毒素B_1的概述
        1.1.1 黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)
        1.1.2 黃曲霉毒素B_1的毒性位點及致毒機理
        1.1.3 黃曲霉毒素B_1的降解研究
        1.1.4 黃曲霉毒素B_1的檢測方法
    1.2 錳過氧化物酶
        1.2.1 錳過氧化物酶的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
        1.2.2 錳過氧化物酶的錳結(jié)合位點與功能
        1.2.3 錳過氧化物酶分子水平的研究
        1.2.4 錳過氧化物酶基因的表達
        1.2.5 錳過氧化物酶的應(yīng)用
    1.3 乳酸克魯維酵母表達系統(tǒng)
        1.3.1 乳酸克魯維酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)勢
        1.3.2 乳酸克魯維酵母的表達載體及其特點
        1.3.3 乳酸克魯維酵母表達系統(tǒng)的應(yīng)用
    1.4 課題的研究意義及內(nèi)容
        1.4.1 課題的研究意義
        1.4.2 課題的研究內(nèi)容
        1.4.3 課題的創(chuàng)新點
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基
        2.1.5 主要試劑
    2.2 分析檢測方法
        2.2.1 蛋白SDS-PAGE分析
        2.2.2 UPLC-TQD分析
    2.3 實驗方法
        2.3.1 感受態(tài)細胞的制備與轉(zhuǎn)化
        2.3.2 不同來源錳過氧化物酶重組酵母的構(gòu)建、誘導(dǎo)表達及其對AFB_1的降解
        2.3.3 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)誘導(dǎo)表達條件的優(yōu)化
        2.3.4 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)降解AFB_1反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.3.5 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)發(fā)酵液降解AFB_1產(chǎn)物研究
        2.3.6 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)發(fā)酵液對花生中AFB_1降解效果評估
        2.3.7 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)傳代穩(wěn)定性檢測
    2.4 數(shù)據(jù)分析軟件
3 結(jié)果與討論
    3.1 重組酵母的構(gòu)建和其發(fā)酵液降解AFB_1實驗
        3.1.1 重組菌的構(gòu)建
        3.1.2 錳過氧化物酶重組酵母的發(fā)酵培養(yǎng)與誘導(dǎo)表達
        3.1.3重組菌發(fā)酵液降解AFB_1
    3.2 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)誘導(dǎo)表達條件優(yōu)化
        3.2.1 誘導(dǎo)溫度的優(yōu)化
        3.2.2 誘導(dǎo)時間的優(yōu)化
        3.2.3 誘導(dǎo)轉(zhuǎn)速的優(yōu)化
        3.2.4 誘導(dǎo)培養(yǎng)基中Hemin濃度的優(yōu)化
        3.2.5 誘導(dǎo)培養(yǎng)基初始pH優(yōu)化
        3.2.6 誘導(dǎo)培養(yǎng)基中MnSO_4濃度的優(yōu)化
        3.2.7 誘導(dǎo)培養(yǎng)基中半乳糖濃度的優(yōu)化
        3.2.8 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)誘導(dǎo)表達條件優(yōu)化正交試驗
    3.3 重組菌發(fā)酵液降解AFB_1反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.3.1 反應(yīng)時間的優(yōu)化
        3.3.2 反應(yīng)溫度的優(yōu)化
        3.3.3 反應(yīng)體系pH的優(yōu)化
        3.3.4 反應(yīng)體系中MnSO_4濃度的優(yōu)化
        3.3.5 反應(yīng)體系中發(fā)酵液Phc Mn P含量的優(yōu)化
        3.3.6 葡萄糖添加量的優(yōu)化
        3.3.7 葡萄糖氧化酶添加量的優(yōu)化
        3.3.8 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)發(fā)酵液降解AFB_1條件優(yōu)化正交試驗
    3.4 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)發(fā)酵液降解AFB_1產(chǎn)物研究
    3.5 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)發(fā)酵液對樣品中AFB_1 降解效果評估
    3.6 重組菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)傳代穩(wěn)定性研究
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻
附錄 :作者在攻讀碩士學(xué)位期間研究成果



本文編號：3182981