發(fā)布時間：2021-05-11 02:05

　　蛋白酶是一類能催化肽鍵水解的生物催化劑,常作為添加劑被應(yīng)用在洗滌產(chǎn)品中。本文首先從解脂耶氏酵母菌株（W29）中提取DNA片段,運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增技術(shù),從解脂耶氏酵母中克隆得到兩種可能產(chǎn)蛋白酶的cDNA序列并連入pPICZα載體,之后將其導(dǎo)入到畢赤酵母GS115和X33中進(jìn)行活性表達(dá),共得到四種重組子,經(jīng)篩選得到產(chǎn)蛋白酶的菌株P(guān).pastoris GS115/pPICZα-AXP。其次,經(jīng)搖瓶發(fā)酵篩選得到蛋白酶的高產(chǎn)菌株,從培養(yǎng)時間、碳源、培養(yǎng)環(huán)境pH和接種量上對發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。最后,將重組畢赤酵母細(xì)胞在3L三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng),利用超濾手段對發(fā)酵液進(jìn)行濃縮。流化床造粒工藝對酶液進(jìn)行造粒處理,探究了造粒過程的影響因素,并對顆粒的性質(zhì)進(jìn)行比較檢測,探究了最佳的造粒手段。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:（1）合成了外源載體表達(dá)工程菌株畢赤酵母GS115/pPICZα-AXP。重組畢赤酵母GS115/pPICZα-AXP菌株在酪平板培養(yǎng)基上菌落形態(tài)表現(xiàn)突出。利用高濃度的Zeocin（1000μg/mL）篩選多拷貝轉(zhuǎn)化子,初步培養(yǎng)重組畢赤酵母經(jīng)發(fā)酵所產(chǎn)酶活力為18.9U/mL。（2）搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)P.pa... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 洗滌劑用堿性蛋白酶的概述
        1.1.1 洗滌劑用酶的發(fā)展
        1.1.2 洗滌劑用酶
    1.2 蛋白酶的微生物表達(dá)
        1.2.1 蛋白酶在微生物中表達(dá)的研究進(jìn)展
        1.2.2 巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)
    1.3 蛋白酶的造粒處理
        1.3.1 蛋白酶造粒的目的
        1.3.2 蛋白酶造粒的前景與發(fā)展
        1.3.3 蛋白酶造粒的影響因素
    1.4 本課題研究的目的和意義
第二章 重組蛋白酶工程菌株的構(gòu)建
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)過程
        2.3.1 W29基因組DNA的提取與處理
        2.3.2 構(gòu)建基因克隆的運(yùn)載體(質(zhì)粒)
        2.3.3 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.4 SDS-PAGE電泳驗(yàn)證
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 重組蛋白酶工程菌株的培養(yǎng)發(fā)酵
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.4.1 畢赤酵母重組表達(dá)菌株的發(fā)酵
        3.4.2 酶活力測定
        3.4.3 去污力測定
    3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.5.1 高產(chǎn)酶的篩選
        3.5.2 最佳培養(yǎng)天數(shù)選擇
        3.5.3 最佳培養(yǎng)碳源選擇
        3.5.4 碳源濃度對蛋白酶生產(chǎn)的影響
        3.5.5 最佳初始培養(yǎng)pH選擇
        3.5.6 最佳接種量選擇
        3.5.7 去污力測定
    3.6 討論
    3.7 本章小結(jié)
第四章 蛋白酶造粒技術(shù)的研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
    4.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.4 實(shí)驗(yàn)過程與方法
        4.4.1 造粒前預(yù)處理
        4.4.2 流化床造粒
        4.4.3 處方影響因素考察
        4.4.4 工藝影響因素考察
        4.4.5 酶活力測定
        4.4.6 顆粒性質(zhì)檢測
    4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.5.1 預(yù)處理結(jié)果
        4.5.2 處方因素影響
        4.5.3 工藝因素影響
        4.5.4 顆粒熱穩(wěn)定性檢測
        4.5.5 包衣含酶顆粒粒徑分布
    4.6 討論
    4.7 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 展望與建議
參考文獻(xiàn)
作者簡介與攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3180504