發(fā)布時間：2021-05-07 21:24

　　阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease,AD）是慢性并且漸進(jìn)發(fā)展的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,占總癡呆類型的60%-70%左右,研究有效的阿爾茲海默癥治療及預(yù)防策略具有十分重大的意義。淀粉樣蛋白級聯(lián)假說被廣泛認(rèn)可,它認(rèn)為患者大腦中的老年斑的主要成分Aβ是阿爾茲海默癥主要的致病因子,由Aβ形成的可溶性聚集體對神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用更強(qiáng),因此針對Aβ可溶性聚集體的抗體對AD的治療有重要意義。納米抗體分子量小、特異性和穩(wěn)定性高、親水性強(qiáng)且易于修飾,是良好的吸附劑配體。因?yàn)榧{米抗體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),需要采用合適的固載方法保證其活性盡可能不受損失。Co³⁺可以介導(dǎo)His標(biāo)簽蛋白和NTA之間的相互作用。Co³⁺-Pr-NTA的復(fù)合物具有熱動力學(xué)穩(wěn)定性,與螯合劑或還原劑反應(yīng)微弱,可用于納米抗體的固載。本研究探究了納米抗體的固載條件,將固載的納米抗體用于Aβ的檢測和Aβ的吸附去除,初步探究腦脊液Aβ的去除效果。（1）本研究原核表達(dá)純化了兩種抗Aβ納米抗體SDP6和SH2,并進(jìn)行了活性測定。結(jié)果顯示經(jīng)過一次固定化金屬離子親和層析后的SDP6的純度在90%以上,... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1.文獻(xiàn)綜述
    1.1 阿爾茲海默癥的機(jī)理、診斷和治療
        1.1.1 阿爾茲海默癥
        1.1.2 阿爾茲海默癥的致病機(jī)制
        1.1.3 阿爾茲海默癥的治療
        1.1.4 靶向Aβ治療阿爾茲海默癥的策略
    1.2 納米抗體
        1.2.1 納米抗體
        1.2.2 納米抗體的應(yīng)用
    1.3 納米抗體的固載
        1.3.1 蛋白固載
        1.3.2 納米抗體的固載
    1.4 腦脊液循環(huán)
    1.5 本研究的目的、意義與內(nèi)容
2.抗Aβ納米抗體的表達(dá)純化及活性檢測
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 材料及試劑
        2.2.2 主要儀器與耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 重組納米抗體的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.2 菌體破碎
        2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.3.4 固定化金屬離子親和層析
        2.3.5 納米抗體的超濾換液、濃縮與保存
        2.3.6 重組蛋白濃度測定
        2.3.7 重組蛋白純度分析及回收率計算
        2.3.8 ELISA法檢測納米抗體活性
        2.3.9 ThT-F法測定納米抗體活性
        2.3.10 Biacore測定納米抗體親和常數(shù)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
        2.4.1 重組抗Aβ納米抗體的表達(dá)和純化
        2.4.2 ELISA法檢測納米抗體活性
        2.4.3 ThT-F法檢測納米抗體活性
        2.4.4 Biacore測定納米抗體親和常數(shù)
    2.5 本章小結(jié)
3.吸附劑的制備
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 主要儀器與耗材
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 納米抗體的固載
        3.3.2 H_2O_2影響SH2納米抗體的活性
        3.3.3 固載后納米抗體的穩(wěn)定性檢測
        3.3.4 吸附劑對Aβ的吸附動力學(xué)考察
        3.3.5 吸附劑對Aβ的血清吸附考察
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 納米抗體的固載條件的選擇
        3.4.2 固載后納米抗體的穩(wěn)定性檢測
        3.4.3 吸附劑對Aβ的吸附動力學(xué)考察
        3.4.4 吸附劑對Aβ的血清吸附考察
    3.5 本章小結(jié)
4 吸附劑的應(yīng)用
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 主要儀器與耗材
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 吸附劑用于對Aβ的夾心法免疫檢測
        4.3.2 AD模型小鼠的模擬腦脊液微透析
        4.3.3 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立
        4.3.4 AD模型小鼠的行為學(xué)檢測
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 吸附劑用于對Aβ的夾心法免疫檢測
        4.4.2 AD模型小鼠的腦脊液微透析
        4.4.3 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立
        4.4.4 AD模型小鼠的行為學(xué)檢測
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A SDP6和SH2的蛋白序列
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號：3174082