釀酒酵母一直被用來制造對(duì)人類有益的代謝產(chǎn)物,并且近年來發(fā)現(xiàn)酵母來源的葡聚糖具有提高動(dòng)物免疫力的作用。釀酒酵母有兩種形態(tài):營(yíng)養(yǎng)形態(tài)和子囊包裹的孢子形態(tài)。酵母子囊孢子壁的結(jié)構(gòu)與營(yíng)養(yǎng)態(tài)細(xì)胞不同,其最外層是二酪氨酸層,次外層是殼聚糖,內(nèi)層是葡聚糖層,最內(nèi)層是甘露糖層;而酵母營(yíng)養(yǎng)態(tài)細(xì)胞壁最外層是甘露糖蛋白,內(nèi)層是葡聚糖,最內(nèi)層是幾丁質(zhì)層。釀酒酵母來源的葡聚糖（Zymosan）是一種堿不溶性的β-1,3鍵和β-1,6鍵連接的葡聚糖高聚物,能夠被巨噬細(xì)胞識(shí)別和吞噬,并且能夠增強(qiáng)動(dòng)物免疫力,刺激細(xì)胞因子產(chǎn)生,抗病毒抗腫瘤抗感染等作用,還具有抑菌的作用。酵母chs3Δ突變體的孢子壁的殼聚糖層合成缺陷從而暴露葡聚糖層,設(shè)計(jì)利用chs3Δ作為葡聚糖微球檢測(cè)其免疫性;酵母dit1Δ突變體孢子壁的二酪氨酸層合成缺陷從而暴露殼聚糖層,殼聚糖是由氨基多糖組成的,其具有免疫佐劑的作用,具有良好的生物相容性,具有抗菌消炎的作用,同時(shí)也能刺激增強(qiáng)免疫反應(yīng)。因此本研究利用chs3Δ突變體孢子作為葡聚糖球,dit1Δ突變體作為殼聚糖球,并且檢測(cè)其與酵母野生型孢子,營(yíng)養(yǎng)態(tài)酵母對(duì)巨噬細(xì)胞刺激作用,我們發(fā)現(xiàn)野生型孢子,dit1Δ,... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 概述
    1.2 釀酒酵母營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞以及子囊孢子壁結(jié)構(gòu)概述
        1.2.1 釀酒酵母營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞壁成分
        1.2.2 釀酒酵母孢子壁結(jié)構(gòu)以及成分
    1.3 巨噬細(xì)胞受體以及信號(hào)通路概述
        1.3.1 巨噬細(xì)胞補(bǔ)體受體以及免疫球蛋白受體
        1.3.2 巨噬細(xì)胞表面模式識(shí)別受體
        1.3.3 其他受體
    1.4 本論文的主要研究?jī)?nèi)容
        1.4.1 立題依據(jù)和研究意義
        1.4.2 本論文主要研究?jī)?nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 細(xì)胞以及培養(yǎng)條件
        2.1.3 引物
        2.1.4 質(zhì)粒
        2.1.5 培養(yǎng)基和試劑配制
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)溶液及試劑和儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 綠色熒光酵母孢子的構(gòu)建
        2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.3 酵母培養(yǎng)和酵母孢子純化
        2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
            2.2.4.1 RAW264.7 細(xì)胞培養(yǎng)以及HEK293T細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.4.2 CHO-K1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.4.3 細(xì)胞因子的檢測(cè)
            2.2.4.4 巨噬細(xì)胞與酵母或孢子共培養(yǎng)
            2.2.4.5 血清對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的影響
            2.2.4.6 巨噬細(xì)胞對(duì) Zymosan 的吞噬
            2.2.4.7 巨噬細(xì)胞對(duì) Latex beads 的吞噬
            2.2.4.8 抑制 Syk，PI3K 信號(hào)通路對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的影響
            2.2.4.9 F-actin 染色實(shí)驗(yàn)
            2.2.4.10 細(xì)胞轉(zhuǎn)化質(zhì)粒方法
            2.2.4.11 早期內(nèi)吞體和晚期內(nèi)吞體定位
            2.2.4.12 巨噬細(xì)胞吞噬釀酒酵母的溶酶體定位實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 釀酒酵母野生型孢子配體探究實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 純化釀酒酵母孢子吞噬體
        2.2.7 構(gòu)建受體基因敲除型巨噬細(xì)胞及吞噬效率檢測(cè)
        2.2.8 逆轉(zhuǎn)錄病毒構(gòu)建基因表達(dá)的細(xì)胞系及吞噬效率分析
        2.2.9 CHO-K1 細(xì)胞表達(dá)MAC-1 受體吞噬效率分析
        2.2.10 抑制型受體SIRPa和 FcγIIB對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬酵母孢子影響
        2.2.11 小GTPase對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬酵母孢子影響
        2.2.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 巨噬細(xì)胞對(duì)釀酒酵母孢子高效吞噬依賴于二酪氨酸的存在
        3.1.1 綠色熒光釀酒酵母構(gòu)建以及孢子的純化
        3.1.2 巨噬細(xì)胞對(duì)野生型酵母孢子的吞噬依賴于其孢子壁二酪氨酸層的存在
        3.1.3 釀酒酵母孢子的吞噬依賴于Syk以及PI3K
        3.1.4 釀酒酵母孢子吞噬后與內(nèi)吞體融合進(jìn)入溶酶體
        3.1.5 二酪氨酸層對(duì)于釀酒酵母孢子高效吞噬是必需的分子結(jié)構(gòu)
        3.1.6 釀酒酵母野生型孢子與營(yíng)養(yǎng)態(tài)酵母導(dǎo)致吞噬的配體不同
        3.1.7 巨噬細(xì)胞識(shí)別野生型酵母孢子依賴于二酪氨酸
    3.2 巨噬細(xì)胞識(shí)別酵母孢子的受體探究
        3.2.1 酵母孢子吞噬體的純化
        3.2.2 釀酒酵母營(yíng)養(yǎng)態(tài)和孢子吞噬體蛋白組質(zhì)譜分析
        3.2.3 構(gòu)建受體敲除的細(xì)胞系并分析其對(duì)孢子吞噬影響
        3.2.4 CD14介導(dǎo)部分孢子的吞噬并依賴于RNA配體的存在
        3.2.5 G-coupled受體對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的影響
        3.2.6 Fc受體通用γ鏈不參與酵母孢子吞噬過程
        3.2.7 MAC-1參與介導(dǎo)釀酒酵母孢子的吞噬
    3.3 抑制型受體和小GTP酶對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的作用
        3.3.1 Sirpa對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬酵母以及孢子的影響
        3.3.2 FcγIIB對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬酵母和孢子的影響
        3.3.3 Rho GTPase對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的影響
        3.3.4 RAP1A以及RRAS2 參與巨噬細(xì)胞吞噬酵母孢子過程
    3.4 本研究小結(jié)
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
附錄
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3157791