蜂蛹是蜂的幼蟲和蛹,含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),其中主要包括蛋白質(zhì)、脂肪和微量元素。蜂蛹蛋白具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等生物活性,但目前國內(nèi)對蜂蛹只進行簡單的生產(chǎn)加工,絕大多數(shù)的蜂蛹資源未得到有效地開發(fā)利用,造成蜂蛹資源的浪費,對蜂蛹多肽的制備、純化及其生物活性的研究較少。本課題組前期對蜂蛹多肽進行了初步研究,表明其純化組分有較好的抗氧化活性,值得進一步研究。本文將在前期工作基礎(chǔ)上,利用堿性蛋白酶對蜂蛹蛋白進行酶法水解制備蜂蛹多肽,并采用DEAE-Sepharose Fast Flow離子層析法和Sephadex G-25凝膠柱層析法對蜂蛹多肽進行分離純化,得到兩種多肽純化組分BPP-21和BPP-22,并對這兩種純化組分進行初步表征;以小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞為研究對象,研究蜂蛹多肽純化組分的體外免疫調(diào)節(jié)活性及其調(diào)節(jié)機制;采用環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠模型,研究蜂蛹多肽純化組分的體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)活性,該研究可為蜂蛹多肽功能食品的研究與開發(fā)提供基礎(chǔ),為蜂蛹資源的綜合利用提供新途徑。主要研究內(nèi)容如下:（1）蜂蛹多肽的制備、純化和初步表征。采用酶解法制備蜂蛹多肽,選用堿性蛋白酶水解蜂蛹蛋白得到... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

BPP-21和BPP-22的凝膠電泳Figure2.3Tricine-SDS-PAGEgelelectrophoresisoftheBPP-21andBPP-22

江蘇大學碩士學位論文29圖3.1BPP-21（a）和BPP-22（b）對RAW264.7細胞活力的影響；*P<0.05,**P<0.01,與空白對照組相比Figure3.1EffectofBPP-21(a)andBPP-22(b)ontheproliferationofRAW264.7cells.*P<0.05,**P<0.01vs.Blankgroup.3.3.2BPP-21和BPP-22對RAW264.7巨噬細胞吞噬能力的影響巨噬細胞在炎癥的發(fā)生、維持、宿主防御、促進和解決中起著至關(guān)重要的作用[92]，其吞噬功能是機體最重要的非特異性免疫反應(yīng)之一。因此，本研究采用不同濃度的BPP-21和BPP-22處理RAW264.7細胞，研究蜂擁多肽的免疫活性。不同濃度的PP-21和BPP-22對巨噬細胞吞噬能力的影響結(jié)果如圖3.2所示，與空白組相比，BPP-21和BPP-22在濃度為25μg/mL時，可以顯著提高RAW264.7細胞的吞噬能力（P<0.05），在濃度為50、100和200μg/mL時，可以極顯著提高細胞的吞噬能力（P<0.01），并呈劑量依賴關(guān)系。表明BPP-21和BPP-22可激活巨噬細胞，增強其吞噬能力。與BPP-21相比，BPP-22使RAW264.7巨噬細胞具有更強的吞噬能力。

蜂蛹多肽的分離純化及其免疫調(diào)節(jié)活性研究30圖3.2BPP-21和BPP-22對RAW264.7細胞吞噬能力的影響；*P<0.05,**P<0.01,與空白對照組相比Figure.3.2EffectofBPP-21andBPP-22onthephagocytosisofRAW264.7cells.*P<0.05,**P<0.01vs.Blankgroup.3.3.3BPP-21和BPP-22對RAW264.7細胞分泌細胞因子的影響3.3.3.1BPP-21和BPP-22對RAW264.7細胞分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ水平的影響當機體受到炎癥病理損傷，受到外在病原體攻擊，會引起細胞分泌IL-6、TNF-α等細胞因子�；罨木奘杉毎僧a(chǎn)生多種細胞因子來調(diào)節(jié)細胞和體液免疫反應(yīng)，如TNF-α、IL-2和IFN-γ[93-95]。BPP-21和BPP-22對RAW264.7細胞分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ水平的影響結(jié)果如圖3.3所示，與空白對照組相比，BPP-21和BPP-22在實驗設(shè)計劑量25、50、100和200μg/mL下均可極顯著提高IL-2和TNF-α的分泌量（P<0.01），在實驗設(shè)計劑量范圍內(nèi)均可極顯著提高IFN-γ的分泌量（P<0.01），表明BPP-21和BPP-22都對RAW264.7細胞具有激活作用，使細胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的分泌量顯著增加。


本文編號：3101327