隨著基因工程技術(shù)的快速發(fā)展,大量的重組蛋白通過基因重組技術(shù)所生產(chǎn),然而從復(fù)雜的混合體系中將目標(biāo)蛋白分離純化出來是一項(xiàng)復(fù)雜而艱巨的任務(wù)。研究和開發(fā)新型的蛋白分離純化介質(zhì)以及經(jīng)濟(jì)、快速、簡便的分離純化體系,對于實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)和商業(yè)化應(yīng)用具有重要理論和實(shí)踐意義。本論文以殼聚糖和纖維素為起始原料,利用綠色溶劑離子液體（1-丁基-3-甲基咪唑）氯鹽（[BMIM]Cl）作為溶解體系,制備得到蛋白分離純化介質(zhì)殼聚糖/纖維素球珠（CCB）,彌補(bǔ)了殼聚糖粉末顆粒微小、剛性不足、不易回收利用等缺點(diǎn);隨后對其進(jìn)行各項(xiàng)結(jié)構(gòu)、特征進(jìn)行表征,在固定化金屬離子親和層析（IMAC）原理的基礎(chǔ)上進(jìn)一步將其應(yīng)用于組氨酸標(biāo)簽蛋白分離純化。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:（1）考察了不同殼聚糖和纖維素比例對球珠成球性的影響,結(jié)果表明:當(dāng)殼聚糖與纖維素的比例為4:1時(shí),得到直徑為3 mm的形狀規(guī)則的球珠。隨后利用傅里葉紅外變換光譜（FT-IR）對其進(jìn)行官能團(tuán)分析,結(jié)果顯示CCB在成型的過程中,殼聚糖和纖維素主要以分子鏈上的羥基通過氫鍵的形式進(jìn)行交聯(lián);透射電鏡（TEM）顯示殼聚糖和纖維素分別呈現(xiàn)的是球狀、針狀形態(tài),而CCB為兩者... 

【文章來源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＩＭＡＣ和組氨酸標(biāo)簽蛋Ｈ親和示怠圖??Ｆｉｇ．?１－１?Ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ａｆｆｉｎｉｔｙ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｈｅ?ｈｉｓ－ｔａｇｇｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｎｄ?ＩＭＡＣ??

圖２－３?＋同組分比例的殼聚糖／纖維素球珠外觀形貌圖??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?ｏｆ?ｃｈｉｔｏｓａｎ／ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｂａｓｅｄ?ｂｅａｄ?（ＣＣＢ）??結(jié)合表２－２和圖２－３可以看出，隨著纖維素的加入，有利于球珠的形成，說??明纖維素的加入有利于球珠的剛性的增加，這是由于纖維素分子有極性，分子鏈??之間的相互作用力很強(qiáng)，其中六元的吡喃結(jié)構(gòu)致使旋轉(zhuǎn)困難，并且分子內(nèi)和分子??間都能形成氫鍵致使糖苷鍵不能旋轉(zhuǎn)，從而使得剛性增加；但纖維素加入過多的??時(shí)候（即ＣＥＬ：ＣＳ大于１：１時(shí)），反而使得球珠的拖尾狀態(tài)突出；而當(dāng)混合體系中??ＣＳ：ＣＥＬ大于或者等于１：１時(shí)，球珠具有較好的成型性，隨著反應(yīng)體系中殼聚糖??的量增多，所形成的球珠顆粒越來越飽滿，富有彈性，結(jié)構(gòu)也越來越緊湊；當(dāng)??ＣＳ：ＣＥＬ為４：１時(shí)

Ｆｉｇ．?２－４?ＦＴ－ＩＲ?ｏｆ?ｃｈｉｔｏｓａｎ?（ａ），?ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?（ｂ），?ＣＣＢ?（ｃ）?ａｎｄ?Ｃｕ２＋－ＣＣＢ?（ｄ）??２．４．３．３殼聚糖／纖維素球珠（ＣＣＢ）的熱重曲線分析（ＴＧＡ）??殼聚糖、纖維素和ＣＣＢ的熱重分析曲線如圖２－５所示，從圖中可以看出，??殼聚糖和ＣＣＢ的熱穩(wěn)定性十分相似，但要比纖維素低。然而，在３３０?°Ｃ之后，??其熱穩(wěn)定性呈現(xiàn)了一個(gè)逆反的趨勢，溫度在３３０°Ｃ到４００?°Ｃ之間，纖維素在第??二階段的降解過程出現(xiàn)了一個(gè)急劇的下降過程，這個(gè)過程的失重率大約為７８％，??這跟Ｔｒａｎ等＿人的報(bào)道相一致。從２８０?°Ｃ到６００°Ｃ之間，殼聚糖的第二階段的??降解過程可以解釋為殼聚糖骨架在相對高溫的條件下出現(xiàn)了急劇的降解，失重率??大約為５０％。??從圖２－５可以得出，與殼聚糖的熱重曲線相比，ＣＣＢ在２６０?°Ｃ內(nèi)的失重率??較小，表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。這可能是由于殼聚糖和纖維素發(fā)生交聯(lián)，殼聚糖和??纖維素分子之間存在著較強(qiáng)的相互作用的結(jié)果。??１８??


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