裂殖壺菌（Schizochytrium）是一種可在細(xì)胞內(nèi)合成超長碳鏈脂肪酸的單細(xì)胞異養(yǎng)微藻。人們通過誘變篩選以及發(fā)酵優(yōu)化等手段,實(shí)現(xiàn)了其高密度工業(yè)化生產(chǎn)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),裂殖壺菌在發(fā)酵后期細(xì)胞內(nèi)脂肪酸發(fā)生選擇性水解,從而導(dǎo)致DHA富集。為了揭示裂殖壺菌胞內(nèi)參與脂肪酸水解的關(guān)鍵脂肪酶基因的作用機(jī)制,本論文克隆了Schizochytrium sp.S31中的脂肪酶基因STGL2和STGL3,并在畢赤酵母中進(jìn)行表達(dá),獲得重組蛋白,系統(tǒng)分析了裂殖壺菌脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì),為裂殖壺菌的基因工程改造提供了理論依據(jù)。首先,本研究在Schizochytrium sp.S31基因組測序的基礎(chǔ)上,利用生物信息學(xué)手段篩選了兩個(gè)脂肪酶基因STGL2和STGL3。以裂殖壺菌RNA為模板,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA片段,再經(jīng)過PCR擴(kuò)增得到目的基因。隨后將目的基因連接到pPIC9K載體上,獲得重組質(zhì)粒pPIC9K-STGL2和pPIC9K-STGL3。其次,將重組質(zhì)粒pPIC9K-STGL2和pPIC9K-STGL3轉(zhuǎn)染畢赤酵母SMD1168,篩選得到重組轉(zhuǎn)化子SMD1168/pPIC9K-STGL2和SMD1168/... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

脂肪酶空間結(jié)構(gòu)

圖 1-2 脂肪酶催化脂質(zhì)水解的機(jī)制Fig. 1-2 The hydrolysis catalyzed mechanisms of lipase物脂肪酶性質(zhì)及活性檢測源的微生物理化性質(zhì)差距較大且脂肪酶活性受到很多因素的影響響脂肪酶活性的主要因素。一般來說，真菌脂肪酶的最適反應(yīng)溫

碼的氨基酸序列與釀酒酵母中 Tgl3p、Tgl4p 和 Tgl5p 進(jìn)化樹圖譜基因與已知的脂肪酶序列相比于其他脂肪酶基因具有較高的同源表 2-7 Schizochytrium sp. S31 基因組脂肪酶信息Tab. 2-7 Genomic lipases information of Schizochytrium sp. S31名稱 位置 編碼 大�。╞TGL2 scaffold70.t7 19075-20364(-) 1290TGL3 scaffold75.t2 1780-2649(-) 870

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：2939826