本文目的是構建菊粉酶基因、果膠酶基因及木聚糖酶基因,充分利用菊芋的主要成分。首先,將菊粉酶基因整合到實驗室前期構建好的半乳糖(GAL)誘導型和磷酸甘油酸激酶(PGK)組成型這兩種強啟動子的表達載體中來促進釀酒酵母對菊粉的利用,通過培養(yǎng)基優(yōu)化提高酵母的乙醇產率,篩選出優(yōu)勢啟動子PGK。為解決菊芋中果膠、木聚糖不能被釀酒酵母直接利用等難題,將果膠酶基因和木聚糖酶基因整合到含有PGK啟動子的表達載體中,促進酵母對底物的利用。其次,分別將菊粉酶基因、木聚糖酶基因和果膠酶基因通過電轉化的方法導入到畢赤酵母中,發(fā)酵完成后測定乙醇濃度。在這三種不同基因的作用下,將菊芋中各類多糖水解轉化為發(fā)酵性單糖制備燃料乙醇,這些酵母在燃料乙醇的制備應用上具有重要價值。本研究的主要結果:(1)釀酒酵母宿主,以菊粉為底物的培養(yǎng)基中,野生型釀酒酵母產乙醇濃度為2.7 g/L,含PGK啟動子轉基因酵母產乙醇濃度為71.74 g/L;含GAL啟動子轉基因酵母產乙醇濃度為60.35 g/L,以木聚糖為底物的培養(yǎng)基中,野生型釀酒酵母產乙醇濃度為0.909 g/L,含PGK啟動子轉基因酵母產乙醇濃度為11.17g/L;以果膠為底... 

【文章來源】：武漢輕工大學湖北省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

菊粉的分子結構

INU基因擴增及表達載體構建Fig.2.5AmplificationofINUgeneandconstructionofexpressionvector

質粒圖譜

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同提取方法對菊芋塊莖總糖及還原糖含量的影響[J]. 田萌,蔣曉婷,田潔,王麗慧,鐘啟文.  青海大學學報. 2017(05)
[2]海藻糖與熱激蛋白在釀酒酵母耐受乙醇脅迫中的作用[J]. 方華,李灝.  中國生物工程雜志. 2014(06)
[3]果膠酶活力的測定方法研究[J]. 張飛,岳田利,費堅,袁亞宏,高振鵬.  西北農業(yè)學報. 2004(04)
[4]分光光度法測定果膠酶活性方法的研究[J]. 李忠福,徐建國.  黑龍江醫(yī)藥. 2002(06)
[5]酒精發(fā)酵中應用酸性蛋白酶的研究[J]. 趙華,趙樹欣,張維,鄒海晏.  食品與發(fā)酵工業(yè). 1997(02)

博士論文
[1]食品級釀酒酵母高效分泌/展示表達系統(tǒng)構建[D]. 郭欽.浙江大學 2009

碩士論文
[1]釀酒酵母不同生長周期細胞對乙醇脅迫的響應[D]. 易晨峰.北京化工大學 2015
[2]以菊芋為原料同步糖化發(fā)酵生產燃料乙醇研究[D]. 楊利博.河北科技大學 2010



本文編號：2926542