目的:初步測定酒糟粗提物的成分并探討酒糟粗提物對肝癌HepG2細胞的抑制作用及其相關作用機制。方法:使用液相色譜-質譜聯(lián)用儀(LC-MS)分析酒糟粗提物的成分。采用RTCA檢測不同濃度酒糟粗提物對肝癌HepG2細胞的抑制作用。在不同濃度酒糟粗提物刺激肝癌HepG2細胞24h后,利用流式細胞儀檢測的細胞周期分布,使用Real-Time qPCR及Western Blot檢測周期周期相關蛋白及其依賴性激酶的表達量的變化;使用Transwell實驗檢測其遷移及侵襲能力的變化;利用流式細胞術檢測細胞凋亡率的變化情況,Real-Time qPCR及Western Blot檢測凋亡相關標志性分子表達量的變化;Western Blot檢測PI3K-AKT通路相關分子表達量的變化。結果:LC-MS測得酒糟粗提物中含有43種物質;濃度為24.9μg/ml的酒糟粗提物對肝癌HepG2細胞的增殖影響不大(p0.05),濃度為49.5μg/ml的酒糟粗提物在12h對肝癌HepG2細胞的增殖影響不大(p0.05),除此外,隨酒糟粗提物濃度及刺激時間的增加,與對照組0μg/ml相比,處理組的肝癌HepG2細胞增殖能力受到了明顯抑制(p0.05),作用24h后的半數(shù)抑制濃度IC50為75.5μg/ml。HepG2細胞的侵襲遷移能力受到了明顯抑制,并且受抑制的HepG2細胞數(shù)隨酒糟粗提物濃度的增加而增多(p0.05);隨酒糟粗提物濃度的增加,肝癌HepG2細胞的S期占比逐漸升高,S期相關蛋白CyclinA及其激酶CDK2的表達逐漸降低;處理組肝癌HepG2細胞的促凋亡分子Bax、CYTC、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-Caspase-3表達量逐漸升高(p0.05),而抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3表達逐漸降低(p0.05);PI3K-AKT通路中p-PI3K及p-AKT表達逐漸降低(p0.05),t-PI3K及t-AKT未發(fā)生明顯變化(p0.05)。結論:酒糟粗提物含多種活性物質;酒糟粗提物呈時間濃度依賴性抑制HepG2細胞的增殖;酒糟粗提物呈濃度依賴性抑制HepG2細胞遷移侵襲;酒糟粗提物通過下調S期相關蛋白CyclinA及其激酶CDK2的表達,誘導肝癌HepG2細胞主要阻滯在細胞周期S期;酒糟粗提物通過抑制PI3K-AKT通路,激活介導凋亡的線粒體通路,引起肝癌HepG2細胞凋亡。
【學位單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TS261.9;TQ460.6;R735.7
【部分圖文】：

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圖 2 A:RTCA 結果；B：不同濃度藥物在加藥后不同時間點對 HepG2 細胞 NCI 值的影響。C: 24h 的劑量反應曲線。注：*** p＜0.001（與對照組 0μg/ml 相比）

3 酒糟粗提物抑制 HepG2 細胞的遷移及侵襲結果表明，隨著酒糟粗提物濃度升高，在遷移組和侵襲組中穿ranswell小室的肝癌HepG2細胞數(shù)量均明顯減少，表明經(jīng)酒糟粗提物后肝癌HepG2細胞的遷移、侵襲能力降低，與對照組0μg/ml相比有顯異（p<0.05），見圖3。
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本文編號：2893083