桃拓酚(toratol)是一種典型的桃拓烷型二萜,最早是通過超臨界CO_2技術從羅漢松屬植物桃拓羅漢松的芯材中萃取而出的,并且顯示出高效的生物活性、人體安全性和產(chǎn)品配方兼容性,在歐美均被列入藥妝品范疇。本文以羅漢松枝葉(Podocarpus macrophyllus Thunb.D.Don)作為原材料,對其甲醇提取物中乙酸乙酯和氯仿極性部位進行系統(tǒng)分離,并對其抗氧化和抑制酪氨酸酶活性進行初步研究,旨在發(fā)掘羅漢松中的天然活性成分,尋找與toratol結(jié)構(gòu)、活性類似的化合物作為替代資源,同時也為羅漢松在美白和抗衰老化妝品中的應用提供重要的科學依據(jù)。1.采用了羅漢松總二萜的檢測方法。以totarol為對照品,采用紫外分光光度法測定羅漢松提取物的總二萜含量,得到線性方程為:A=0.0074C+0.0023,R~2=0.9998(濃度C/(mg/mL),吸光度/A)。利用超聲波輔助提取優(yōu)化羅漢松總二萜提取工藝。在單因素試驗的基礎上,采用響應面(Box-Behnken)試驗設計,得到最佳提取工藝為:甲醇濃度80.00%、液料比26.00:1(mL:g);提取溫度63.00℃、提取時間20 min,提取3次,總二萜得率為1.13%(RSD=0.89%)。以V_C作為陽性對照,考察羅漢松總二萜對DPPH自由基(DPPH·)、超氧陰離子自由基(O_2~-·)、羥基自由基(·OH)的清除能力。結(jié)果表明,羅漢松總二萜對三種自由基都有不同程度的清除效果,且在試驗濃度范圍內(nèi),其清除率與質(zhì)量濃度呈線性關系。在羅漢松總二萜質(zhì)量濃度為0.59 mg/mL時,其對DPPH·、O_2~-·和·OH自由基的最大清除率分別為81.71%、66.27%、38.60%。2利用浸提法,先以甲醇為溶劑提取羅漢松中的有效成分,將提取液濃縮成浸膏,加水制成懸浮液,再依次用石油醚,氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到四個不同極性部位,然后采用硅膠柱色譜、C-18反相硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20)柱色譜、制備薄層色譜(PTLC)、半制備型高效液相色譜(RPLC)及重結(jié)晶等現(xiàn)代分離技術,從乙酸乙酯和氯仿萃取部位共分離得到7個化合物,利用核磁共振光譜(~1H-NMR、~(13)C-NMR、HMQC、HMBC)、質(zhì)譜等現(xiàn)代光譜分析技術對所得化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定,確認得到的化合物為:totarol(1),4β-carbosy-19-nortotarol(2),1-deoxy-2α-hydroxy-nagilactone A(3),podocarpus flavone A(4),bilobetin(5),β-sitosterol(6),tridecanoic acid(7)。其中化合物1、3、4、5、7為首次從羅漢松中分離得到。3以L-dopa為底物考察羅漢松總二萜及獲得的單體化合物對酪氨酸酶的抑制作用,結(jié)果表明:羅漢松總二萜和單體化合物對酪氨酸酶均有一定的抑制作用,且差異顯著,抑制能力由強到弱依次為totarolbilobetin總二萜4β-carboxy-19-nortotarolβ-sitosterol。對抑制活性表現(xiàn)最好totarol進行動力學研究,利用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法確定其對多酚氧化酶抑制作用的機制類型。結(jié)果表明:totarol屬于可逆的混合型抑制劑,米氏常數(shù)K_m為0.33 mg/mL,抑制常數(shù)K_I為0.44 mg/mL,K_(IS)為0.85mg/mL。
【學位單位】：吉首大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TQ658
【部分圖文】：

圖 2.3 不同因素對羅漢松總二萜得率的影響Fig. 2.3 Response surface plots illustrating the mutual effects of factors on the yield of diterpenoids再對回歸模型進行進一步典型性分析，得到最佳提取工藝條件為提取溫度為62.68℃、甲醇濃度 80.46%、液料比 26.34(mL/g)，預測值為 1.14%。為方便操作，將最優(yōu)方案定為提取溫度 63.00℃、甲醇濃度 80.00%、液料比 26.00:1(mL/g)。按最

圖3.1分離流程圖
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本文編號：2848657