我們日常生活中植物油種類繁多,如菜籽油、豆油和花生油等,但各種植物油的脂肪酸組成和含量并不相同,為了均衡營養(yǎng)、合理攝入植物油中的脂肪酸,開發(fā)出更加簡便、靈敏的脂肪酸檢測技術是非常必要的。目前檢測植物油中脂肪酸的方法主要有氣相色譜法和氣質聯(lián)用法,而這些方法在分析之前都需要將沸點較高的三酰甘油酯衍生為沸點較低的甲酯化合物,在這個過程中都會產生比較多的副產物,存在反應不完全的問題;另外,油脂中脂肪酸的定量分析大多采用峰面積歸一法,只能得到相對含量。針對傳統(tǒng)方法出現(xiàn)的問題,本研究以植物油為分析對象,通過一系列的條件優(yōu)化、方法學考察及其驗證實驗建立了高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ELSD法)、高效液相色譜-熒光檢測法(HPLC-FLD法)以及高效液相色譜-激光誘導熒光檢測法(HPLC-LIFD法),更加簡便、靈敏的檢測脂肪酸。實驗結果如下:第一部分利用高效液相色譜與蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用,通過色譜條件的優(yōu)化,對9種脂肪酸實現(xiàn)了良好的分離。并且在該方法中脂肪酸的線性關系較好;穩(wěn)定性和精密度的相對標準偏差都在3%之內;芥酸最低檢測限達到10~(-6) mol/L,其余脂肪酸的最低檢測限達到10~(-5) mol/L;平均回收率都在90%-110%之內。本方法中樣品無需衍生,前處理過程簡便,可以得到植物油中脂肪酸的絕對含量,但只能檢測到C14-C22脂肪酸。第二部分合成了熒光標記試劑,1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC)作為縮合劑,4-二甲基吡啶(DMAP)作為催化劑,在35℃C下40 min內完成脂肪酸的熒光標記衍生。在熒光檢測器激發(fā)波長440 mn,發(fā)射波長520 nm時,通過色譜條件的優(yōu)化在50 min內對19種脂肪酸實現(xiàn)了良好的分離。并且該方法中19種脂肪酸都有較好的線性關系;穩(wěn)定性和精密度的相對標準偏差都在4%之內;最低檢測限都達到10~(-8) mol/L;平均回收率都在90%-110%之內。該方法衍生過程簡單,能夠檢測C_3-C_(22)的脂肪酸,并且比高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法具有更高的靈敏度。第三部分利用高效液相色譜與激光誘導熒光檢測器聯(lián)用,通過色譜條件的優(yōu)化,在毛細管柱管徑為530 μm,流速0.2 mL/min時,對19種脂肪酸實現(xiàn)了良好的分離。該方法中19種脂肪酸都有較好的線性關系;穩(wěn)定性和精密度的相對標準偏差都在3%之內;11種脂肪酸的最低檢測限達到10~(-9) mol/L,其余8種脂肪酸的最低檢測限達到10~(-8)mol/L;平均回收率都在90%-110%之內。該方法操作簡便,并且比高效液相色譜-熒光檢測法具有更高的靈敏度。
【學位單位】：中南林業(yè)科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TS227
【部分圖文】：

ｏｆ?ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ?ｌｉｇｈｔ?ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ?ｄｅｔｅｃｔｏｒ?ｉｓ?７５°Ｃ；ｔｈｅ?ｏｉｌ－ｆｒｅｅ?ａｉｒ?ｐｕｍｐ?ｈａｓ?ａ?ｃａｒｒｉｅｒ?ｇａｓ?ｆｌｏｗ?ｒａｔｅ?ｏｆ??２．０?Ｌ／ｍｉｎ；?ｔｈｅ?ｇａｉｎ?ｉｓ?４．??由上圖２．１可知，隨著流動相ｐＨ的增加，脂肪酸的分離效果越來越好，尤??其對于１和２脂肪酸。所以將流動相ｐＨ＝４．５２時作為最優(yōu)的色譜分離條件。??２．４．２各脂肪酸的定性分析??采用優(yōu)化好的色譜條件對混合脂肪酸標準樣品及各脂肪酸標準樣品進行進??樣測定。所得色譜分離圖如圖２．２所示。??１３??

２．４．３方法學考察??２．４．３．１線性關系考察??各脂肪酸標準品的標準曲線如下圖２．３所示。各脂肪酸的線性關系、相關系??數(shù)和線性范圍總結如下表２．４所示：??１４??

２．４．４樣品中脂肪酸的分析??將制備的茶油和菜籽油樣品用優(yōu)化好的色譜條件依次進行進樣測定。茶油??和菜籽油的色譜圖如圖２．４所示。茶油和菜籽油的脂肪酸含量如表２．９所示。??２．４ｘ１０５－｜??Ａ??１．６ｘ１０ｓ－??＞??Ｈ??￡?８．０ｘ１０４－??ｃ??〇？〇?＿??／■—??Ａ?＊？???????????—????０?２０?４０?６０??Ｔｉｍｅ?／?ｍｉｎ??２．４ｘ１０ｓ－ｉ??Ｂ??１．６ｘ１０５－??＞??ｉ?，??ＣＯ?？：??Ｉ?８．０ｘ１０、??１?Ｉ?３?５?＿??０．０－?ＬＵｏ?ｌ?＊?」???ｉ????０?２０?４０?６０??Ｔｉｍｅ?／?ｍｉｎ??圖２．４樣品的液相色譜圖??Ｆｉｇ．２．４?Ｔｈｅ?ｌｉｑｕｉｄ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ?ｏｆ?ｏｉｌ?ｓａｍｐｌｅｓ??圖中Ａ為茶油，Ｂ為菜籽油；１為亞麻酸，２為亞油酸，３為軟脂酸，４為油酸，５為??硬脂酸，６為芥酸，７為山崳酸。??Ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｉｇｕｒｅ，?Ａ：ｔｅａ?ｏｉｌ，?Ｂ：ｒａｐｅｓｅｅｄ?ｏｉｌ；?ｌ：ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ?ａｃｉｄ，２：ｌｉｎｏｌｅｉｃ?ａｃｉｄ，３：ｐａｌｍｉｔｉｃ?ａｃｉｄ？４：ｏｌｅｉｃ??ａｃｉｄ，５：ｓｔｅａｒｉｃ?ａｃｉｄ，６：ｅｒｕｃｉｃ?ａｃｉｄ，ａｎｄ?７：ｂｅｈｅｎｉｃ?ａｃｉｄ．．??１８??
【參考文獻】

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本文編號：2843810