接骨木(Sambucus Williamsii Hance)為忍冬科接骨木屬植物,別名舒筋樹(shù)、馬尿騷、接骨草等,分布于溫帶和亞熱帶地區(qū),擁有20多個(gè)物種。接骨木適應(yīng)性較強(qiáng),對(duì)氣候要求不嚴(yán),生長(zhǎng)在我國(guó)東北,西南和華北等地。接骨木資源在民間廣泛應(yīng)用于治療活血化癖、舒筋活絡(luò)、續(xù)筋接骨、消腫止痛等,近代藥理學(xué)表明接骨木中含有豐富的化學(xué)活性成分,主要有酚酸類、黃酮類、三萜類、木質(zhì)素類、甾醇類等,能夠抗菌消炎、清熱解毒、祛風(fēng)除濕、消腫止痛。臨床應(yīng)用還將接骨木制成配劑、膏藥、蜜丸、湯劑等廣泛應(yīng)用于治療骨折、跌打損傷和骨質(zhì)疏松。本研究旨在對(duì)接骨木葉中黃酮類成分進(jìn)行提取工藝優(yōu)化及對(duì)其純化方法進(jìn)行考察,并探究接骨木葉總黃酮的抗氧化作用及其抗骨質(zhì)疏松作用機(jī)制。采用乙醇法對(duì)接骨木葉總黃酮進(jìn)行提取,以提取時(shí)間、提取溫度、液料比、乙醇體積分?jǐn)?shù)等進(jìn)行單因素水平分析,并通過(guò)Box-Behnken試驗(yàn)確定最佳提取條件;接骨木葉的粗黃酮純化工藝是通過(guò)靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)對(duì)AB-8大孔吸附樹(shù)脂、D4020大孔吸附樹(shù)脂、D101大孔吸附樹(shù)脂、NKA-9大孔吸附樹(shù)脂、S8大孔吸附樹(shù)脂五種樹(shù)脂中進(jìn)行篩選,動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)的樣品液體積、上樣速度、樣品濃度、樣品PH值、洗脫劑用量、洗脫劑體積分?jǐn)?shù)等6個(gè)條件進(jìn)行篩選確定純化最優(yōu)水平;體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)采用乙醇誘導(dǎo)小鼠建立氧化損傷模型,設(shè)計(jì)接骨木葉總黃酮低(80.5mg/kg)、中(161mg/kg)、高(322mg/kg)劑量組,并以VC作為陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行灌胃。給藥后,對(duì)小鼠的血清和肝臟中的丙二醛(MDA)含量、還原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平進(jìn)行測(cè)定,并對(duì)肝臟組織進(jìn)行病理學(xué)分析,以考察接骨木葉總黃酮對(duì)酒精造成肝細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用;在抗骨質(zhì)疏松研究中分別采用維甲酸和鏈脲佐菌素建立小鼠骨質(zhì)疏松模型,設(shè)計(jì)接骨木葉總黃酮低(80.5mg/kg)、中(161mg/kg)、高(322mg/kg)劑量組,以維D鈣片為陽(yáng)性對(duì)照,進(jìn)行灌胃,檢測(cè)小鼠鈣、磷、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨鈣素(BGP)含量,并制作小鼠股骨病理學(xué)切片討論接骨木葉黃酮的抗骨質(zhì)疏松作用相關(guān)機(jī)制。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.通過(guò)Design-Expert8.06軟件中Box-Behnken分析可知,乙醇體積分?jǐn)?shù)(A)、液料比(B)、溫度(C)對(duì)接骨木葉總黃酮得率影響主次順序?yàn)镃AB,其中得到最佳提取工藝條件為提取溫度70℃,提取時(shí)間60min,乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,液料比70:1(mL:g),三次平行試驗(yàn)驗(yàn)證其得率平均值為7.101%。2.通過(guò)對(duì)5種大孔吸附樹(shù)脂的靜態(tài)吸附和解吸試驗(yàn)結(jié)果可知,利用D101大孔吸附樹(shù)脂對(duì)接骨木葉總黃酮的純化效果最好。通過(guò)大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附的單因素篩選試驗(yàn)結(jié)果表明,接骨木葉總黃酮的動(dòng)態(tài)解吸最佳條件為50%乙醇洗脫液體積為40mL,流速1.5mL/min,樣品溶液濃度為1.2mg/mL。純化接骨木葉中總黃酮得率為15.43mg/g,比純化前總黃酮含量提高73%。3.抗氧化試驗(yàn)結(jié)果表明,接骨木葉總黃酮中、高劑量組可顯著提高的血清和肝臟中SOD、GSH水平(P0.01),降低MDA含量(P0.01),消除自由基,達(dá)到良好的體內(nèi)抗氧化效果。肝臟組織的病理學(xué)結(jié)果表明,接骨木葉總黃酮的低、中、高劑量組可有效降低小鼠肝臟細(xì)胞的脂肪含量,明顯改善肝臟細(xì)胞的溶解現(xiàn)象,說(shuō)明接骨木葉總黃酮可減少小鼠肝臟組織細(xì)胞脂肪的積聚效應(yīng),能夠減輕酒精對(duì)肝細(xì)胞的氧化損傷。有資料顯示,氧化應(yīng)激是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的重要原因之一,本研究表明,接骨木葉總黃酮具有良好的抗氧化作用,所以對(duì)骨質(zhì)疏松的產(chǎn)生起到有效預(yù)防作用。4.抗骨質(zhì)疏松試驗(yàn)結(jié)果表明,在維甲酸造成的小鼠骨質(zhì)疏松模型中,接骨木葉總黃酮能夠顯著提高小鼠血清中鈣和ALP水平,降低P、ACP、TRAP、BGP水平,可說(shuō)明接骨木葉總黃酮能夠?qū)τ删S甲酸引起的骨質(zhì)疏松具有良好的治療作用。在鏈脲佐菌素造成糖尿病合并小鼠骨質(zhì)疏松模型中,接骨木葉總黃酮能夠顯著升高血清中鈣,ALP水平,降低P、ACP、TRAP、BGP水平,從而起到抗骨質(zhì)疏松的作用。通過(guò)上述接骨木葉總黃酮治療這兩種不同骨質(zhì)疏松模型的效果可以發(fā)現(xiàn),接骨木葉中總黃酮均可對(duì)兩種骨質(zhì)疏松具有良好的治療效果,尤其對(duì)維甲酸的治療效果更好,所以推測(cè)其抗骨質(zhì)疏松原理可能是代替雌激素,進(jìn)而起到良好的抗骨質(zhì)疏松作用,但其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TQ464
【部分圖文】：

15Fig. 3-1 Effect of ethanol volume fraction on flavonoid，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)在 30%-50%時(shí)，總黃酮得率基-70%時(shí)，總黃酮的得率不斷提高，最高可達(dá)到 7酮得率反而下降，可能是由于有些黃酮類物質(zhì)是溶出，另外當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)過(guò)高時(shí)，有一些醇溶黃酮類物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)，也造成了總黃酮得率的下降[94]黃酮得率最高。率的影響分?jǐn)?shù)為 70%，提取時(shí)間為 1h,料液比為 1:70 不變的50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的溫度提取接骨影響，結(jié)果見(jiàn)圖 3-2。

Fig. 3-2 Effect of temperature on the yield of flavonoids總黃酮得率的整體趨勢(shì)，當(dāng)溫度從 40℃增加到 70達(dá)到 4%左右，可能因?yàn)闇囟容^低時(shí)溶劑的溶解能，所以當(dāng)溫度增大，分子熱運(yùn)動(dòng)劇烈，細(xì)胞膜的通但當(dāng)溫度從 70℃增加到 90℃時(shí)，總黃酮得率反而類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，反而使總黃酮得率降低，由此可知率的影響數(shù)為 70%，溫度為 70℃，提取時(shí)間為 1h 不變的前提0:1、50:1、60:1、70:1、80:1 的料液比提取接骨木的影響，結(jié)果見(jiàn)圖 3-3。

圖 3-2 溫度對(duì)黃酮得率的影響Fig. 3-2 Effect of temperature on the yield of flavonoids黃酮得率的整體趨勢(shì)，當(dāng)溫度從 40℃增加到 70℃到 4%左右，可能因?yàn)闇囟容^低時(shí)溶劑的溶解能力所以當(dāng)溫度增大，分子熱運(yùn)動(dòng)劇烈，細(xì)胞膜的通透當(dāng)溫度從 70℃增加到 90℃時(shí)，總黃酮得率反而降類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，反而使總黃酮得率降低，由此可知率的影響為 70%，溫度為 70℃，提取時(shí)間為 1h 不變的前提下:1、50:1、60:1、70:1、80:1 的料液比提取接骨木葉影響，結(jié)果見(jiàn)圖 3-3。

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本文編號(hào)：2824109