發(fā)布時(shí)間：2020-09-10 20:53

　　 葫蘆素廣泛分布于葫蘆科屬植物中,生物活性強(qiáng),在提高細(xì)胞免疫機(jī)能,保肝、護(hù)肝等方面具有一定作用。臨床醫(yī)學(xué)上用于治療慢性肝炎,尤其在肝癌方面具有輔助治療的功效。黃瓜是葫蘆科一年生植物,目前在中國(guó)種植廣泛。黃瓜含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,黃瓜葉片則主要用于中藥治療兒童腹瀉和痢疾。本論文以葫蘆科甜瓜屬黃瓜的鮮嫩葉為材料,進(jìn)行黃瓜嫩葉中葫蘆素的制備工藝以及純化工藝的優(yōu)化,并利用微生物實(shí)驗(yàn)探究葫蘆素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制情況。主要結(jié)果如下:采用超聲波輔助提取工藝在葫蘆素的制備中分別考察超聲波功率、提取時(shí)間、提取溫度以及料液比四個(gè)因素對(duì)葫蘆素提取量的影響。通過設(shè)計(jì)四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)表,得出最佳提取工藝為料液比1:11(g/mL)、提取時(shí)間20min、提取溫度80℃、超聲波功率50%(300W)。此工藝下葫蘆素的提取量為10.568μg/mL。在葫蘆素純化工藝優(yōu)化中,首先對(duì)S-8、AB-8、D-101、X-5、HPD-100、XAD-7六種型號(hào)大孔吸附樹脂進(jìn)行篩選,確定選用吸附-解吸效果均表現(xiàn)良好的D-101型樹脂進(jìn)行后續(xù)葫蘆素純化工藝的優(yōu)化。在靜態(tài)純化工藝優(yōu)化中,首先繪制吸附-解吸動(dòng)力學(xué)曲線,確定靜態(tài)吸附飽和時(shí)間為4h,解吸平衡時(shí)間為2.5h;再考察不同的洗脫劑濃度以及溫度對(duì)純化效果的影響。確定最佳洗脫劑濃度為70%乙醇溶劑,靜態(tài)吸附溫度40℃,解吸溫度50℃。在動(dòng)態(tài)純化工藝優(yōu)化部分,繪制泄漏曲線以及洗脫曲線,確定濃度為13.17μg/mL的待純化葫蘆素溶液最佳進(jìn)樣量為270mL,洗脫劑用量170mL為宜;考察不同的流動(dòng)速度對(duì)樹脂吸附-解吸純化效果的影響,確定最佳的粗提液上樣速度以及洗脫劑解吸速度同為2BV/h。結(jié)合靜態(tài)及動(dòng)態(tài)吸附-解吸的最佳工藝對(duì)葫蘆素粗提液進(jìn)行純化,將純化物經(jīng)高效液相色譜分析,葫蘆素的含量可達(dá)95.56%,純度較高。采用牛津杯法進(jìn)行黃瓜嫩葉中葫蘆素的抑菌性研究。結(jié)果表明葫蘆素對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑制效果尤為明顯,最低抑菌濃度分別為11.17μg/mL和22.33μg/mL,對(duì)沙門氏菌生長(zhǎng)的抑制稍弱于前兩者,最低抑菌濃度為44.65μg/mL。自此葫蘆素可由黃瓜嫩葉中制得,作為一種新型天然抑菌劑進(jìn)行開發(fā)利用,也為探索其在抗癌、提高人體免疫力等領(lǐng)域的作用奠定理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TQ464
【部分圖文】：

圖 3-11 葫蘆素標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖Fig.3-11 HPLC of Cucurbitacin standard圖 3-12 葫蘆素純化物高效液相色譜圖Fig.3-12 HPLC of Cucurbitacin purified product 3-11、3-12 可以看出，目標(biāo)產(chǎn)物葫蘆素在 10-15min 內(nèi)有峰出現(xiàn)，且有拖尾現(xiàn)象（馮雪松等，2007）。葫蘆素純化物的高效液相色譜圖中面積峰外其余六種物質(zhì)含量極少，所得產(chǎn)品的純度較好。章首先通過不同型號(hào)大孔樹脂對(duì)葫蘆素類化合物純化的效果進(jìn)行篩選

圖 3-12 葫蘆素純化物高效液相色譜圖Fig.3-12 HPLC of Cucurbitacin purified product-11、3-12 可以看出，目標(biāo)產(chǎn)物葫蘆素在 10-15min 內(nèi)有峰出現(xiàn)，且拖尾現(xiàn)象（馮雪松等，2007）。葫蘆素純化物的高效液相色譜圖中積峰外其余六種物質(zhì)含量極少，所得產(chǎn)品的純度較好。首先通過不同型號(hào)大孔樹脂對(duì)葫蘆素類化合物純化的效果進(jìn)行篩選素在吸附和解吸兩方面都表現(xiàn)優(yōu)異的大孔樹脂進(jìn)行葫蘆素純化工定選用 D-101 型大孔吸附樹脂。吸附-解吸優(yōu)化中，繪制靜態(tài)動(dòng)力學(xué)曲線，考察吸附時(shí)間及解吸時(shí)間吸葫蘆素效果的影響。吸附過程隨時(shí)間延長(zhǎng)，樹脂的吸附逐漸達(dá)到h 時(shí)，大孔樹脂對(duì)葫蘆素的吸附基本完全；解吸過程選用 70%乙醇直至?xí)r間達(dá)到 2.5h，洗脫劑對(duì)葫蘆素的洗脫基本達(dá)到平衡。在考察附-解吸葫蘆素的效果影響中確定了最佳吸附溫度為 40℃，解吸

圖 4-1 葫蘆素對(duì)三種菌種生長(zhǎng)的抑制影響 Inhibition of Cucurbitacin on the growth of thr表 4-4 葫蘆素對(duì)菌種生長(zhǎng)的抑制影響le 4-4 Inhibition of Cucurbitacin on the grow菌 種希氏大腸桿菌 金黃色葡萄球菌 沙3.0±0.5mm 10.0±0.5mm 7.3.0±0.5mm 9.0±0.5mm 6.2.0±0.5mm 9.0±0.5mm 7.菌種生長(zhǎng)的抑制影響，葫蘆素對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸桿菌三種細(xì)菌對(duì)葫蘆素的濃度變化較為敏感小或變化不明顯。如圖 4-2，大腸桿菌為 11.17μg/mL 的情況下仍可以表現(xiàn)出

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