【摘要】：山刺玫(Rosa davurica Pall.)是薔薇科薔薇屬純天然植物,廣泛生長(zhǎng)于我國(guó)東北地區(qū)的山區(qū)和丘陵地帶,其活性成分主要包括黃酮類、三萜類和人體必需氨基酸等�，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明山刺玫具有抗氧化、抗衰老、免疫增強(qiáng)等功效,具有極高的藥用價(jià)值。近年來大部分研究報(bào)道主要集中在山刺玫的果實(shí)上,而對(duì)于山刺玫葉的研究報(bào)道較少。所以,本研究以山刺玫葉中總黃酮為研究對(duì)象,在此基礎(chǔ)上,首次從抗氧化、免疫增強(qiáng)和抗衰老機(jī)制方面研究山刺玫葉總黃酮的生理作用。利用醇提法結(jié)合正交試驗(yàn)法對(duì)山刺玫葉總黃酮的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,并利用D101大孔樹脂進(jìn)行總黃酮的純化。在此基礎(chǔ)上,測(cè)定不同采摘季節(jié)山刺玫葉總黃酮含量變化。山刺玫葉總黃酮的抗衰老作用,主要在體外抗氧化方面對(duì)·DPPH自由基、·OH自由基、O_2~-·自由基、ABTS~+·自由基的清除作用進(jìn)行檢測(cè)。在體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)方面建立衰老模型,選取SPF級(jí)昆明種小鼠60只,雌雄各半并隨機(jī)分為空白組、衰老模型組、維生素E組(50 mg/(kg·d))和山刺玫葉總黃酮低、中、高劑量組(1.0、2.0、4.0 g/(kg·d)),共6組(n=10),空白組小鼠均用等體積生理鹽水灌胃和皮下注射,其余各組小鼠均頸背部皮下注射125 mg/(kg·d)D-半乳糖。6周后分別測(cè)定各組小鼠肝臟、血清和腦組織中的SOD、GSH-Px酶活力及MDA含量。其次,從免疫增強(qiáng)方面檢測(cè)各組小鼠免疫器官指數(shù);應(yīng)用ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α;HE染色法觀察各組小鼠腦組織的形態(tài)學(xué)變化;以及對(duì)利用ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行考察,進(jìn)而探究山刺玫葉總黃酮的免疫增強(qiáng)機(jī)制。本試驗(yàn)研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.由單因素分析結(jié)合正交實(shí)驗(yàn)法確定了山刺玫葉總黃酮最佳提取工藝為:80%乙醇濃度、料液比1:30 g/mL、水浴溫度80℃、水浴時(shí)間2 h、得率為4.976%;通過對(duì)5~9月之間的總黃酮含量測(cè)定結(jié)果可知:8月中旬的山刺玫葉總黃酮含量最高,可達(dá)33.84mg/g;D101大孔樹脂純化條件確定為:上樣液濃度為原提取液稀釋4倍、吸附速率為2BV/h、上樣液pH值為4、解吸液為70%乙醇、洗脫速率為2 BV/h、洗脫液用量為7BV,在此條件下,所得總黃酮的純度為57.3%。2.山刺玫葉總黃酮的體外抗氧化活性測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果表明:山刺玫葉總黃酮對(duì)·DPPH、·OH、O_2~-·和ABTS~+·等四種自由基均具有良好的清除作用,清除率可隨樣品濃度增加而增大,其抗氧化能力與V_C接近;山刺玫葉總黃酮的體內(nèi)抗氧化研究表明:與衰老模型組比較,山刺玫葉總黃酮中、高劑量組能顯著或極顯著提高衰老模型組小鼠肝臟中的SOD酶活力(P0.05,P0.01),同時(shí)中、高劑量組也能顯著或極顯著降低小鼠肝臟中的MDA含量(P0.05,P0.01);山刺玫葉總黃酮中、高劑量組能顯著或極顯著提高衰老模型組小鼠血清中的SOD、GSH-Px酶活力(P0.05,P0.01),同時(shí)中、高劑量組也能顯著或極顯著降低血清中的MDA含量(P0.05,P0.01);山刺玫葉總黃酮高劑量組能顯著提高衰老模型組小鼠腦組織中的GSH-Px酶活力(P0.05),且高劑量組也能顯著降低腦組織中的MDA含量(P0.05);維生素E組小鼠肝臟、血清和腦組織中的SOD、GSH-Px酶活力和MDA含量均有極顯著差異(P0.01)。3.在免疫增強(qiáng)方面,與衰老模型組比較,山刺玫葉總黃酮中、高劑量組能極顯著提高衰老模型組小鼠腦指數(shù)(P0.01),山刺玫葉總黃酮低、中、高劑量組均能顯著提高衰老模型組小鼠脾臟和胸腺指數(shù)(P0.05);山刺玫葉總黃酮中、高劑量組小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-4顯著或極顯著高于衰老模型組小鼠(P0.05,P0.01),而山刺玫葉總黃酮低、中、高劑量組小鼠血清中細(xì)胞因子IL-6、TNF-α顯著或極顯著低于衰老模型組小鼠(P0.05,P0.01);維生素E組小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α均有極顯著差異(P0.01)。與衰老模型組比較,山刺玫葉總黃酮低、中、高劑量組小鼠腦組織的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞的壞死及變性情況均有明顯減輕。山刺玫葉總黃酮對(duì)小鼠脾細(xì)胞有增殖作用,對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞中T-淋巴細(xì)胞增殖有抑制作用。由上述結(jié)果可知,山刺玫葉總黃酮具有良好的抗衰老作用,其作用機(jī)制主要是能夠從抗氧化和免疫增強(qiáng)方面對(duì)機(jī)體各組織器官均起到延緩衰老的功效。此研究為合理開發(fā)利用山刺玫葉及其生理活性物質(zhì)提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù),對(duì)山刺玫葉資源在食品領(lǐng)域和臨床應(yīng)用方面的開展運(yùn)用具有積極意義。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TQ464
【圖文】：

圖 3.17 山刺玫葉總黃酮對(duì)衰老模型小鼠血清 IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α 水平的影響ig. 3.17 Effects of total flavonoids in leaves of Rosa davurica Pall. on serum IL-2、IL-4TNF-α concentration of aging model mice相比，*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)；與衰老模型組相比，#表示差異顯著(P<0.05)，##表示差異極顯著(P<0.01)h the control group, while with * means significant difference (*P<0.05), and with** means great significant difference (**P<0.01); Comparehile with#means significant difference (#P<0.05), and with##means great significant difference (##P<0.01).鼠腦組織病理切片觀察

圖 3.17 山刺玫葉總黃酮對(duì)衰老模型小鼠血清 IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α 水平的影響Fig. 3.17 Effects of total flavonoids in leaves of Rosa davurica Pall. on serum IL-2、IL-4、ILTNF-α concentration of aging model mice空白組相比，*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)；與衰老模型組相比，#表示差異顯著(P<0.05)，##表示差異極顯著(P<0.01)。ed with the control group, while with * means significant difference (*P<0.05), and with** means great significant difference (**P<0.01); Compared with roup, while with#means significant difference (#P<0.05), and with##means great significant difference (##P<0.01).3 小鼠腦組織病理切片觀察

且隨著山刺玫葉總黃酮?jiǎng)┝康脑黾�，恢�?fù)程度也逐漸葉總黃酮對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響圖 3.19 山刺玫葉總黃酮提取物對(duì)小鼠脾細(xì)胞增值的影響ffect of total flavonoids in leaves of Rosa davurica Pall. on spleen cell prolifEffects of total flavonoids in leaves of Rosa davurica Pall.9 所示，與模型組相比，隨著總黃酮作用濃度的增加，刺激小鼠關(guān)系。當(dāng)質(zhì)量濃度為 200 μg/mL 時(shí)，山刺玫葉總黃酮 SI 值為

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