【摘要】：叉開網(wǎng)翼藻(Dictyopteris divaricata)為褐藻門網(wǎng)地藻科海藻,廣泛分布于我國(guó)黃海與東海海岸,是功能食品和化妝品綠色原料的優(yōu)質(zhì)來(lái)源。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)叉開網(wǎng)翼藻的研究較少,其水提物的成分分析及活性檢測(cè)尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用響應(yīng)面法對(duì)熱水提取叉開網(wǎng)翼藻多糖(Dictyopteris divaricata sulfated polysaccharides,DDSP)的條件進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)多糖提取物的理化特性和生物活性進(jìn)行研究,主要研究如下:(1)叉開網(wǎng)翼藻多糖提取條件優(yōu)化采用水提醇沉法提取叉開網(wǎng)翼藻多糖,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上利用響應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化提取條件(液料比、提取時(shí)間、提取溫度)。優(yōu)化后的叉開網(wǎng)翼藻多糖最優(yōu)提取條件為:液料比110mL/g、提取時(shí)間6h、提取溫度100℃,得到多糖實(shí)際提取率為3.05%,比優(yōu)化前提高了9.3%。(2)叉開網(wǎng)翼藻多糖的結(jié)構(gòu)鑒定通過(guò)紅外光譜、氣相色譜、葡聚糖凝膠色譜柱層析等現(xiàn)代色譜、光譜技術(shù),結(jié)合酸水解、高碘酸氧化和Smith降解等方法進(jìn)行多糖的結(jié)構(gòu)鑒定。紅外光譜在4000-500cm~(-1)波長(zhǎng)范圍對(duì)叉開網(wǎng)翼藻多糖進(jìn)行掃描后發(fā)現(xiàn)其含有O-H鍵、C-H鍵、C=O鍵、硫酸基團(tuán)和吡喃糖環(huán)等多糖特征峰。多糖糖腈乙酸酯衍生物的氣相結(jié)果顯示,叉開網(wǎng)翼藻多糖由巖藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖五種單糖以相對(duì)摩爾比4.45:2.74:1.00:2.94:1.35的比例組成。經(jīng)比色法檢測(cè),叉開網(wǎng)翼藻多糖中的糖醛酸含量33.7%,硫酸基團(tuán)含量6.0%,利用SephadexG-100葡聚糖凝膠柱測(cè)得叉開網(wǎng)翼藻多糖相對(duì)分子量58.05KDa。結(jié)合高碘酸氧化反應(yīng)和Smith降解結(jié)果發(fā)現(xiàn),叉開網(wǎng)翼藻多糖的主鏈主要以1,3-糖苷鍵連接,且?guī)r藻糖存在1,3-和1,6-糖苷鍵型。(3)叉開網(wǎng)翼藻多糖生物活性分析通過(guò)檢測(cè)叉開網(wǎng)翼藻多糖對(duì)DPPH和羥基自由基的清除能力來(lái)評(píng)估其抗氧化活性,利用CCK-8法以及Griess試劑法研究多糖對(duì)小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞增殖和NO分泌的影響,最后結(jié)合叉開網(wǎng)翼藻多糖對(duì)超氧自由基的清除能力以及酪氨酸酶抑制活性判斷其美白防護(hù)能力�？寡趸瘜�(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,叉開網(wǎng)翼藻具有抗氧化活性,當(dāng)多糖濃度為0.5mg/mL時(shí),其DPPH清除率為67%。與DPPH清除實(shí)驗(yàn)相比,叉開網(wǎng)翼藻多糖對(duì)羥自由基的清除能力較弱,當(dāng)多糖濃度為5mg/mL時(shí),其羥自由基清除率為20.2%。叉開網(wǎng)翼藻多糖能夠顯著促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖和NO分泌,對(duì)酪氨酸酶存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制。綜上所述,叉開網(wǎng)翼藻多糖是一種較為理想的天然生物大分子,其良好的抗氧化活性、潛在的免疫調(diào)節(jié)能力以及顯著的酪氨酸酶抑制活性不僅為叉開網(wǎng)翼藻的綜合利用提供了依據(jù),還為功能食品以及綠色化妝品原料提供了新的來(lái)源。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TQ914.2;TQ281
【圖文】：

圖 3.2 葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 3.2 The standard curve of glucuronic acid圖 3.3 硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 3.3 The standard curve of sodium sulphate

26圖 3.3 硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 3.3 The standard curve of sodium sulphate組成分析及相對(duì)分子量檢測(cè)翼藻多糖的單糖組成利用其糖腈乙酸酯衍生物進(jìn)行氣相種標(biāo)準(zhǔn)單糖的氣相色譜圖進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)（圖 3.4A 和 是一種褐藻糖膠，由巖藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半爾比 4.45:2.74:1.00:2.94:1.35 的比例組成，其中巖藻糖是糖、木糖、半乳糖和甘露糖，這與其他研究人員報(bào)道的褐

清除實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，叉開網(wǎng)翼藻多糖對(duì)人體含量較高的活性氧自由基的體清除能力較低，還需要進(jìn)一步的體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證其抗氧化能力。4.4.3.2 酪氨酸酶抑制活性酪氨酸酶是人體產(chǎn)生黑色素的主要限速酶，由于酪氨酸酶抑制劑能直接抑酪氨酸酶活性，常常被當(dāng)作美白劑添加到美白化妝品中。但酪氨酸酶抑制劑的用不止于此，酪氨酸酶抑制劑還可以添加到食品中延長(zhǎng)食品的貯藏期或者應(yīng)用農(nóng)業(yè)防蟲除害方面[106]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，叉開網(wǎng)翼藻多糖對(duì)酪氨酸酶有抑制作用在 10-50μg/mL 濃度范圍內(nèi)，抑制活性先升高后降低，在 20μg/mL 時(shí)達(dá)到最高47.6%（圖 4.3B）。在正常情況下，激活酪氨酸酶酶活會(huì)使人體內(nèi)黑色素產(chǎn)量加，進(jìn)而導(dǎo)致皮膚變黑，嚴(yán)重時(shí)可能造成色素沉著，形成黃褐斑等常見的皮膚病。酪氨酸酶在氧自由基存在的情況下將酪氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏豙107]，人體內(nèi)存的氧自由基多為超氧自由基和羥自由基，根據(jù)之前的抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)叉開網(wǎng)翼藻多糖對(duì)超氧自由基和羥自由基的清除能力較弱，所以其對(duì)酪氨酸酶抑制機(jī)理主要是與酪氨酸酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制[34]，而不是與氧自由基結(jié)合。(B)

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本文編號(hào)：2775572