【摘要】：鳥苷酸,又名5′-鳥嘌呤核苷酸(Guanosine-5′-monophos-phate,GMP),是組成核酸的五種核苷酸之一,具有特殊的香菇樣鮮味,在食品工業(yè)主要作為食品添加劑和用作調(diào)味品的原料。鳥苷酸亦具有高度生物活性,具有調(diào)節(jié)機體營養(yǎng)代謝、提高機體免疫力及輔助抗腫瘤等功效,但關(guān)于其是否具有肝保護(hù)功效尚未見文獻(xiàn)報道。本課題首先以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)變異菌株為出發(fā)菌株,進(jìn)行鳥苷發(fā)酵工藝優(yōu)化。其次,復(fù)制小鼠四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl_4)、酒精性及刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)急性肝損傷模型,進(jìn)行鳥苷酸對小鼠急性肝損傷肝保護(hù)功效的初步篩選。最后,復(fù)制CCl_4小鼠急性肝損傷模型,觀察鳥苷酸對其肝損傷的保護(hù)功效,探討其肝保護(hù)功效的抗氧化應(yīng)激和抗凋亡機制,為保健食品與肝病治療藥物的篩選提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下:1、對發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行單因素優(yōu)化試驗以及三因素三水平正交試驗,確立了最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方(%):葡萄糖12.0;酵母粉1.6;玉米漿粉0.2;谷氨酸鈉1.0;磷酸氫二鉀0.2;氯化鈣0.2;碳酸鈣2.0;硫酸銨2.0;硫酸鎂0.05。最佳發(fā)酵條件:搖瓶種子培養(yǎng)時間12 h,接種量10%,發(fā)酵溫度36℃,pH 7.0-7.2,發(fā)酵時間72 h。按照優(yōu)化后發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行發(fā)酵,鳥苷濃度最高可達(dá)到10.6 g/L,較優(yōu)化前提高了71%。2、CCl_4、酒精急性肝損傷模型的模型組谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Aanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平較正常對照組極顯著升高(P0.01),表明CCl_4、酒精性急性肝損傷小鼠模型復(fù)制成功;與模型組比較,GMPNa_2 250、125、62.5 mg/kg組小鼠血清ALT、AST活性下降極顯著(P0.01),提示鳥苷酸對CCl_4、酒精性急性肝損傷小鼠肝功能有較好的改善作用。Con A急性肝損傷模型的模型組小鼠血清ALT、AST活性較正常對照組極顯著升高(P0.01),表明Con A急性肝損傷小鼠模型復(fù)制成功;與模型組比較,GMPNa_2 250、125、62.5 mg/kg組小鼠血清ALT、AST活性下降,但統(tǒng)計學(xué)比較無顯著性差異,提示鳥苷酸對Con A急性肝損傷小鼠肝功能改善作用不明顯。3、模型組小鼠血清ALT、AST水平較正常對照組極顯著升高(P0.01),表明CCl_4急性肝損傷小鼠模型復(fù)制成功;與模型組比較,GMPNa_2 250、125 mg/kg組小鼠血清ALT、AST活性極顯著下降(P0.01),同時小鼠肝組織病理切片顯示GMPNa_2 250 mg/kg組小鼠肝組織較模型組明顯改善,提示鳥苷酸對CCl_4急性肝損傷小鼠肝功能有較好的改善作用。GMPNa_2 250 mg/kg組可極顯著升高CCl_4肝損傷小鼠肝組織超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px)及總抗氧化能力(Total antioxidative capacity,T-AOC)水平,降低丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量(P0.01),提示鳥苷酸肝保護(hù)作用與其抗氧化應(yīng)激有關(guān)。GMPNa_2 250 mg/kg組可極顯著下調(diào)CCl_4肝損傷小鼠肝組織含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2Associated X Protein,Bax)mRNA和蛋白表達(dá)水平,上調(diào)B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)mRNA和蛋白表達(dá)水平(P0.01),提示鳥苷酸的肝保護(hù)作用與其抗凋亡作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：TQ920.6;TS201.4
【圖文】：

高達(dá) 250℃時才會分解。鳥苷酸是鳥苷四磷酸(pp 酸(c GMP)和二磷酸鳥苷酸(GDP)的前體分子，既救途徑合成。在生物機體內(nèi)，鳥苷酸可由次黃苷酸呤磷酸化制得[16]。結(jié)構(gòu)式如圖 1 所示:

將其轉(zhuǎn)化為鳥苷酸。一般都是先對枯草芽孢桿菌進(jìn)行斜面培養(yǎng)、種子培養(yǎng)以及發(fā)酵培養(yǎng)獲得鳥苷，再利用三氯氧磷溶液與吡啶溶液對鳥苷磷酸化制得鳥苷酸。反應(yīng)式如圖 2 所示：

圖 3 鳥苷分子結(jié)構(gòu)品工業(yè)上，是食品增鮮劑鳥苷酸的重要原料，目前生產(chǎn)鳥苷酸的酵轉(zhuǎn)化法，利用一定微生物，通過發(fā)酵得到鳥苷，再利用三氯氧苷磷酸化制得鳥苷酸，發(fā)酵轉(zhuǎn)化法得鳥苷水平?jīng)Q定鳥苷酸產(chǎn)量高

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 冷玉杰;;中藥五味子煎劑與藥物性肝損傷治療的相關(guān)性研究[J];中醫(yī)藥信息;2015年06期

2 員美娜;劉志鵬;王佳;劉斯靜;池冰;劉殿武;;脫精氨酸補體C3f對刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年12期

3 李艷君;牛力春;李艷麗;呂昕;戴劍峰;;新兵體檢中谷丙轉(zhuǎn)氨酶增高的原因分析[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;2014年02期

4 朱安妮;李蕊;劉三海;喬艷雪;馮時;苑少欣;張劍平;;四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的建立和優(yōu)化[J];中國肝臟病雜志(電子版);2014年01期

5 盧曉萍;廖鳳霞;胡元發(fā);;HPLC法測定半夏中鳥苷的含量[J];海峽藥學(xué);2011年08期

6 周文曉;趙祥穎;劉建軍;;核苷酸營養(yǎng)功能研究進(jìn)展及應(yīng)用現(xiàn)狀[J];山東食品發(fā)酵;2011年01期

7 馬宏宇;;肝病患者血清中AST/ALT比值的臨床意義[J];臨床合理用藥雜志;2010年21期

8 劉森泉;高秋萍;阮紅;毛童俊;張如意;余瑩瑩;;紫心甘薯多糖對四氯化碳肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J];浙江大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版);2010年05期

9 楊天佑;田靜;常景玲;張明霞;李東霄;;次黃嘌呤流加對鳥苷發(fā)酵的影響[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年08期

10 劉劍;;pH值對鳥苷發(fā)酵的影響[J];科技風(fēng);2010年14期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 牛立慢;TGF-β1/Smad3在四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及其作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

2 朱力杰;北五味子總?cè)�、木脂素對酒精性肝損傷的保護(hù)作用及其機制的研究[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 荊孝東;三肽模擬谷胱甘肽過氧化物酶及其生物學(xué)效應(yīng)研究[D];吉林大學(xué);2014年

2 李捚;5’-鳥苷酸二鈉結(jié)晶工藝的研究[D];華南理工大學(xué);2010年

3 侯方麗;黑米花色苷對CCl_4誘導(dǎo)小鼠肝損傷的保護(hù)作用及其抗氧化機制[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 盛翠;鳥苷產(chǎn)生菌Bacillus subtilis JSIM-G518的改良及其發(fā)酵條件優(yōu)化[D];江南大學(xué);2008年

5 武改紅;鳥苷產(chǎn)生菌的選育及其發(fā)酵條件研究[D];天津科技大學(xué);2005年

本文編號：2756206