【摘要】：魷魚(yú)是一種具有高蛋白低脂肪特點(diǎn)的水產(chǎn)品,因此利用魷魚(yú)制備生物活性肽具有重要的意義。本文選取北太平洋魷魚(yú)足和阿根廷魷魚(yú)足,利用酶解技術(shù),超濾分級(jí)技術(shù)制備具有抗氧化活性和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性的多肽,并使用凝膠層析柱分離出魷魚(yú)足的小分子量的多肽,進(jìn)一步探究北太平洋魷魚(yú)足多肽和阿根廷魷魚(yú)足多肽的抗氧化活性和ACE抑制活性。最后使用計(jì)算機(jī)方法輔助探索北太平洋魷魚(yú)肌球蛋白中具有抗氧化活性和ACE抑制活性的小分子肽。主要研究?jī)?nèi)容如下:(1)魷魚(yú)足多肽最佳酶解工藝的研究:以水解度(degree ofhydrolysis,DH)為指標(biāo),選用木瓜蛋白酶作為酶解用酶。通過(guò)響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添酶量,酶解溫度和液料比三個(gè)因素對(duì)響應(yīng)值均具有顯著性影響,得到北太平洋魷魚(yú)足最佳酶解條件為添酶量 1.41%(w/w),溫度 51.08℃,液料比 2.26:1(v/v),酶解 6h,DH為 30.16±0.31%。阿根廷魷魚(yú)足的最優(yōu)參數(shù)為添酶量1.43%(w/w),溫度50.86℃,酶解6h,液料比2.06:1(v/v),DH為28.98±0.31%。較高DH的魷魚(yú)足酶解液(squidprotein hydrolysate,SPH)為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了基礎(chǔ)。(2)魷魚(yú)足多肽分離純化技術(shù)的研究:首先測(cè)定了北太平洋SPH和阿根廷SPH的DPPH自由基清除率(20.38±0.97%和18.49±0.7%),羥基自由基清除率(9.35 ±0.57%和 7.75±0.36%),總抗氧化能力(0.070±0.003 U/mL 和 0.376±0.004 U/mL)和ACE抑制能力(45.93±0.31%和42.03±0.19%)用來(lái)評(píng)價(jià)魷魚(yú)足SPH的抗氧化活性和ACE抑制活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示北太平洋魷魚(yú)足的抗氧化活性和ACE抑制活性均高于阿根廷魷魚(yú)足。然后采用超濾分級(jí)和Sephadex G-10凝膠層析柱得到SPH-Ⅲ2對(duì)DPPH自由基清除力(DPPH自由基清除率分別為25.86±0.59%和25.95±0.56%)和ACE抑制力(ACE抑制率為75.78±0.63%和75.08±0.71%)最高。經(jīng)過(guò)UPLC測(cè)定,確定北太平洋魷魚(yú)SPH-Ⅲ2和阿根廷魷魚(yú)足多肽SPH-Ⅲ2的分子量分別為634.84 Da和 637.2 Da。(3)計(jì)算機(jī)模擬產(chǎn)生北太平洋魷魚(yú)抗氧化肽和ACE抑制肽(angiotensin converting enzyme inhibitory peptide,ACEIP)的研究:使用植物蛋白酶和脯氨酰內(nèi)肽酶(prolyloligopeptidase,POP)用于魷魚(yú)肌球蛋白重鏈的水解。通過(guò)BIOPEP-UWM和ATHpin數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)出13種抗氧化肽和126種ACEIP。然后,通過(guò)預(yù)測(cè)毒性,過(guò)敏性,胃腸穩(wěn)定性和腸上皮通透性篩選出2種抗氧化肽和30種ACEIP,其中30種ACEIP包括21種已知肽和9種新肽。此外,通過(guò)分子對(duì)接評(píng)估ACEIP與ACE的相互作用機(jī)制。結(jié)果表明,ACEIP的新肽中的QY和QM對(duì)ACE具有潛在的抑制作用。它們可以通過(guò)配位鍵與Zn(IⅡ)結(jié)合,并通過(guò)氫鍵和疏水相互作用深埋在ACE的疏水口袋S1、S2和.S1'中。這項(xiàng)工作表明,.北太平洋魷魚(yú)是抗氧化肽和ACEIP.的良好來(lái)源,也可以用作在計(jì)算機(jī)中探索食源性抗氧化肽和ACE抑制肽的方案。
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：TP391.7;TQ936.16
【圖文】：

第二章魷魚(yú)足多肽制備的工藝優(yōu)化中，與喊性蛋白酶、中性蛋白酶和膜蛋白酶相比，木瓜蛋白酶具有；在鱈魚(yú)皮蛋白酶解中，木瓜蛋白酶也具有最高的水解度［７４］。且與Ｆａ魚(yú)副產(chǎn)物的酶解實(shí)驗(yàn)中得出一致的結(jié)果。因此木瓜蛋白酶對(duì)大多水較高的水解度，且木瓜蛋白酶價(jià)格低，酶活高、熱穩(wěn)定性好、天然衛(wèi)以，本實(shí)驗(yàn)選擇木瓜蛋白酶作為水解蛋白酶。逡逑

．．．．ｊ＾逡逑圖２．１不同酶種條件下魷魚(yú)足的水解度逡逑Ｆｉｇ．邋２．１邋ＤＨ邋ｏｉ邋ｓｑｕｉｄ邋ｔｅｎｔａｃｌｅ邋ｕｎｄｅｒ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｅｎｚｙｍｅ邋ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ逡逑加量對(duì)水解度的影響逡逑．２可看出，使用木瓜蛋白酶在相同料液比、酶解溫度和時(shí)間下，，水解度逐漸提高，當(dāng)添加量達(dá)到１．３％邋（ｗ／ｗ）時(shí)，木瓜蛋白酶能力達(dá)到最高，隨后開(kāi)始下降�？赡苁钱�(dāng)添酶量繼續(xù)增大時(shí)，出多肽分解為氨基酸而使水解度降低。所以添酶量在１．３％邋（ｗ／ｗ）３０ｎ逡逑

逑２．３．２．３酶解時(shí)間對(duì)水解度的影響逡逑由圖２．３可看出，使用木瓜蛋白酶在相同料液比、酶添加量和酶解溫度下，隨著逡逑酶解時(shí)間的增加水解度逐漸增大，在６ｈ之后，水解度基本沒(méi)有變化，推測(cè)可能此時(shí)逡逑酶與底物反應(yīng)基本完全，達(dá)到飽和狀態(tài)，如果繼續(xù)酶解可能會(huì)出現(xiàn)過(guò)度酶解現(xiàn)象。逡逑３０１逡逑＋北太平洋魷魚(yú)足逡逑＋阿根廷魷魚(yú)足逡逑２５－逡逑Ｉ２０＇逡逑＾１５－邐＾逡逑４邐５邐６邐７邐８邐９邐１０逡逑時(shí)間（ｈ）逡逑圖２．３不同時(shí)間下魷魚(yú)足的水解度逡逑Ｆｉｇ．邋２．３邋ＤＨ邋ｏｆ邋ｓｑｕｉｄ邋ｔｅｎｔａｃｌｅ邋ｕｎｄｅｒ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｉｍｅ逡逑２．３．２．４液料比對(duì)水解度的影響逡逑由圖２．４可看出，使用木瓜蛋白酶在相同酶添加量、酶解溫度和時(shí)間下，隨著水逡逑量的增加水解度逐漸增高，在達(dá)到３：１邋（ｖ／ｖ）后，水解度開(kāi)始隨著水量的增加開(kāi)始呈逡逑現(xiàn)平緩下降趨勢(shì)。推測(cè)這可能是因?yàn)殡S著水量的增加，分子運(yùn)動(dòng)活度開(kāi)始提高，酶與逡逑底物反應(yīng)加快，當(dāng)水量持續(xù)增高時(shí)，體系濃度逐漸被稀釋?zhuān)^(guò)多的水量也抑制了酶與逡逑底物的反應(yīng)活度從而抑制了水解反應(yīng)使水解度降低。因此選擇３：１邋（ｖ／ｖ）的液料比較逡逑合適。逡逑２５１邐？＊■北太平洋魷負(fù)足逡逑＋阿根廷魷＆足逡

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本文編號(hào)：2752788