發(fā)布時(shí)間：2020-07-11 16:49

【摘要】：為了能獲得一種安全、穩(wěn)定的藍(lán)色素以及高產(chǎn)藍(lán)色素的菌株,本研究從佛手瓜中分離得到一株產(chǎn)藍(lán)色素鏈霉菌,對(duì)菌株進(jìn)行鑒定和液態(tài)發(fā)酵,采用酸堿提取法獲得藍(lán)色素,并對(duì)藍(lán)色素的性質(zhì)進(jìn)行研究,對(duì)鏈霉菌的發(fā)酵條件和藍(lán)色素的提取方法進(jìn)行優(yōu)化,驗(yàn)證藍(lán)色素用于食品添加劑的可行性,驗(yàn)證該菌株能否高產(chǎn)安全、穩(wěn)定的藍(lán)色素。主要內(nèi)容如下:(1)菌種的分離鑒定。從佛手瓜中篩得一株鏈霉菌FSG-003,從菌種形態(tài)學(xué)特征、菌種生理生化特性以及分子生物學(xué)鑒定三個(gè)方面進(jìn)行鑒定。其形態(tài)學(xué)特征、生理生化特性與花青藍(lán)鏈霉菌十分接近,基于16S rDNA系列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析,鏈霉菌FSG-003與鏈霉菌Streptomyces sp.strain SN0280處于同一分枝,親源關(guān)系最近。(2)鏈霉菌FSG-003的發(fā)酵、藍(lán)色素的提取及條件優(yōu)化。經(jīng)過(guò)響應(yīng)曲面優(yōu)化后的最佳發(fā)酵條件為:地瓜淀粉為碳源、花生餅粉為氮源、培養(yǎng)基起始pH調(diào)節(jié)至7、接種量20%、裝瓶量37%、轉(zhuǎn)速為150 r/min、發(fā)酵溫度為23℃、發(fā)酵9d。經(jīng)過(guò)單應(yīng)素試驗(yàn)獲得的最佳提取條件為:將發(fā)酵液pH調(diào)至12,4℃8000 r/min離心15 min,去沉淀留上清,將上清液調(diào)pH為1,4℃下10000 r/min離心15 min,優(yōu)化后藍(lán)色素的產(chǎn)量高達(dá)11.3 g/L。(3)藍(lán)色素的初步分離鑒定及性質(zhì)研究。由紫外分光光計(jì)測(cè)得藍(lán)色素最大吸收波長(zhǎng)為291 nm;由HPLC初步分離鑒定可知藍(lán)色素粗提物中預(yù)估存在7種以上的物質(zhì);探討多種因素對(duì)藍(lán)色素穩(wěn)定性的影響;經(jīng)過(guò)急性毒性試驗(yàn),可知藍(lán)色素基本無(wú)毒;藍(lán)色素粗提物中不含金屬元素Te和Cd,Pb的含量也很低,Zn元素含量較高;藍(lán)色素對(duì)8種供試菌均有抑菌活性,藍(lán)色素濃度越高,抑制效果越明顯。
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：Q93;TQ920.1;TS264.4
【圖文】：

從佛手中分離所得到一株產(chǎn)藍(lán)色素放線菌，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)和發(fā)酵，制得藍(lán)色素粗提物，本論文主要進(jìn)行菌株的分離鑒定、發(fā)酵提取條件的優(yōu)化以及藍(lán)色素性質(zhì)三個(gè)方面的的研究。技術(shù)路線見圖 1。對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定主要從形態(tài)學(xué)特征、菌種理化特性以及分子生物學(xué)鑒定三個(gè)方面進(jìn)行。對(duì)藍(lán)色素發(fā)酵提取條件的優(yōu)化中，以藍(lán)色素的產(chǎn)量為指標(biāo)，設(shè)置單因素變量試驗(yàn)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用 BBD 響應(yīng)曲面法，選取三個(gè)自變量以藍(lán)色素的產(chǎn)量為試驗(yàn)響應(yīng)值，設(shè)計(jì)發(fā)酵條件擬合二階響應(yīng)面 3 因素 3 水平中心組合試驗(yàn)，分別發(fā)酵提取藍(lán)色素，確定藍(lán)色素的最佳發(fā)酵條件和提取條件。藍(lán)色素的性質(zhì)研究從溶解性、光譜特性、穩(wěn)定性、純度、抑菌性和安全性方面進(jìn)行，通過(guò)對(duì)藍(lán)色素性質(zhì)的研究以及提取工藝的優(yōu)化，驗(yàn)證該菌株能否高產(chǎn)藍(lán)色素，驗(yàn)證藍(lán)色素用于食品添加劑的可行性，為藍(lán)色素的后續(xù)開發(fā)利用提供依據(jù)期望獲得一種安全、穩(wěn)定的藍(lán)色素以及高產(chǎn)藍(lán)色素的菌株，為日后工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)藍(lán)色素研究做準(zhǔn)備。

第二章 菌株的分離及鑒定的大小，并做好記錄。析形態(tài)學(xué)特征劃線培養(yǎng)的菌株，生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)到 4 d 7 d 可見藍(lán)色的菌絲，繼續(xù)培養(yǎng) 15 d 后就可且整個(gè)培養(yǎng)基呈藍(lán)色，說(shuō)明菌株生長(zhǎng)過(guò)程中5 d 的菌落如圖 2-1 所示。

圖 2-3 掃描電鏡下的鏈霉菌 FSG-003（SEMA×10000，B×3000，C×20000，D×10000）Fig. 2-3 The SEM image of streptomyces FSG-003（SEMA×10000，B×3000，C×20000）2.2.2 菌種的生理生化特性通過(guò)鏈霉菌 FSG-003 的生理生化特性試驗(yàn)，所得結(jié)果見表 2-1�？芍�，鏈霉菌 FSG-003 可以使淀粉水解，可以產(chǎn)生纖維素酶，可以使明膠液化，可以產(chǎn)生H2S。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2750669