【摘要】：劍花,為仙人掌科量天尺屬,是一種藥食同源的植物花朵,廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。嶺南中醫(yī)志記載劍花性味甘、涼、入肺,具有清痰熱、除積熱、止氣痛、理痰火等功效,常被用于輔助治療腦動(dòng)脈硬化、心血管疾病、肺結(jié)核、支氣管炎、頸淋巴結(jié)核、腮腺炎等疾病。植物化學(xué)素研究表明劍花富含活性多糖,然而,目前很少有關(guān)于劍花多糖的純化、結(jié)構(gòu)特征及抗氧化和免疫活性研究報(bào)道。因此,本論文初步研究了劍花多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及體外抗氧化和免疫活性,并進(jìn)一步研究了H_2O_2-Fe~(2+)降解對(duì)劍花多糖的影響,為深入地研究和開(kāi)發(fā)劍花多糖提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:(1)采用水提醇沉法制得劍花粗多糖,命名為FHRP�；瘜W(xué)分析表明FHRP的總糖含量為71.08±1.71%、半乳糖醛酸含量為5.12±0.12%,還含有極少量蛋白質(zhì)、硫酸基和葡萄糖醛酸。單糖組成分析表明FHRP由巖藻糖、阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖組成,各單糖摩爾比為32.86:60.46:6.09:0.58。高效液相色譜(HPGPC)分析表明FHRP有四組不同的分子量組分,屬于非均一多糖。紅外光譜(IR)結(jié)果表明FHRP含有α和β構(gòu)型的吡喃酸性多糖。體外抗氧化和免疫實(shí)驗(yàn)表明FHRP具有良好的ABTS自由基清除活性和氧自由基吸收活性,且能顯著促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7分泌NO和IL-6,表明劍花多糖具有潛在的抗氧化和免疫刺激活性。(2)通過(guò)DEAE-Sepharose fast flow陰離子交換柱分離純化FHRP,得到三個(gè)多糖組分(FHRP-1、FHRP-2和FHRP-3),多糖含量分別為84.06±1.01%、80.63±1.97%和80.12±1.25%。HPGPC分析表明FHRP-1有兩個(gè)組分,平均分子量分別為5535.99 kDa和116.89 kDa;而FHRP-2和FHRP-3均只有一個(gè)峰,為均一多糖,分子量分別為55.03kDa和134.26 kDa。單糖組成分析表明FHRP-1、FHRP-2和FHRP-3均由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和巖藻糖組成,FHRP-1的單糖摩爾百分含量比為37.55:54.78:1.31:6.36,區(qū)別于FHRP-2的18.11:70.64:3.72:7.53和FHRP-3的36.90:33.16:0.24:29.70。IR分析表明三者均含有糖醛酸和吡喃糖環(huán)的特征峰,且均含有β構(gòu)型糖苷鍵,但FHRP-1還具有α構(gòu)型糖苷鍵。剛果紅實(shí)驗(yàn)表明在水溶液中,FHRP-1和FHRP-2沒(méi)有三螺旋結(jié)構(gòu),FHRP-3則有三螺旋結(jié)構(gòu);而在弱堿性溶液中,三者均具有三螺旋結(jié)構(gòu)。高碘酸氧化-Smith降解和甲基化結(jié)果表明FHRP-1的糖苷鍵主要有→6)-Galp-(1→、→6)-Glcp-(1→、Galp-(1→、→3,4)-fucp-(1→、→4)-Arap-(1→和→4)-Glcp-(1→;FHRP-2的糖苷鍵主要有→6)-Galp-(1→、→4)-Arap-(1→和→4)-Glcp-(1→;而FHRP-3的糖苷鍵主要有→4)-Arap-(1→、→3)-Glcp-(1→、→6)-Glcp-(1→、→3,4)-fucp-(1→、Galp-(1→、→6)-Galp-(1→和→4)-Glcp-(1→。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)表明FHRP-1、FHRP-2和FHRP-3均能提高RAW264.7細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性,降低丙二醛(MDA)的含量。體外免疫實(shí)驗(yàn)顯示,三者均能顯著提高RAW264.7細(xì)胞的增殖和胞飲能力,促進(jìn)NO、IL-6和TNF-α的分泌,且FHRP-2和FHRP-3的效果優(yōu)于FHRP-1。(3)采用Fe~(2+)-H_2O_2降解法降解FHRP得到兩個(gè)的劍花降解多糖(DFHRP-1和DFHRP-2)。化學(xué)組成分析表明Fe~(2+)-H_2O_2降解對(duì)劍花多糖的多糖含量、蛋白質(zhì)含量和單糖組成沒(méi)有明顯影響。HPGPC分析表明相比FHRP,DFHRP-1和DFHRP-2的分子量顯著降低。SEM結(jié)果顯示DFHRP-1和DFHRP-2的表面有不規(guī)則的孔洞,且表面較FHRP的光滑,降解破壞了多糖原有的表面形貌。功能實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果表明與FHRP相比,DFHRP-1和DFHRP-2的持水能力和乳化性有所降低,持油能力有所提高。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)表明DFHRP-1表現(xiàn)出較強(qiáng)的ABTS自由基清除活性,其次是DFHRP-2和FHRP;而DFHRP-1和DFHRP-2的氧自由基吸收能力(ORAC)值均高于FHRP。此外,體外免疫調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)表明降解多糖能更顯著地提高RAW 264.7細(xì)胞分泌NO和IL-6的含量,且DFHRP-1的效果最強(qiáng),其次是DFHRP-2和FHRP。這些結(jié)果表明劍花降解多糖的功能和生物活性與其分子量大小密切相關(guān),DFHRP-1和DFHRP-2可開(kāi)發(fā)一種多用途的成分應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和化妝品領(lǐng)域。
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TQ281
【圖文】：

圖 1-1 劍花Fig. 1-1 Hylocereusundatus(Haw.) Britton et Rose.5 本課題的研究意義及主要內(nèi)容.5.1 研究背景和目的劍花具有分布廣范、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)，是傳統(tǒng)的藥食同源的材料。多糖在劍花中量較高，但現(xiàn)階段對(duì)劍花多糖的研究報(bào)道大多集中在其提取工藝以及生物活性方面，它們的作用機(jī)理、構(gòu)效關(guān)系的研究還不夠深入，不利于劍花在食品、保健及醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用。同時(shí)，研究報(bào)道證明，多糖分子量的大小會(huì)影響其生理活性，但目前還沒(méi)有關(guān)降解對(duì)劍花多糖的影響的報(bào)道。大量研究報(bào)道證明，植物多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性和免疫調(diào)節(jié)作用，如靈芝多糖、

第一章 緒論學(xué)組成、初級(jí)結(jié)構(gòu)、體外抗氧化活性和免疫活性。（2）通過(guò)DEAE-Sepharose fast flow層析柱純化FHRP，得到四種多糖組分（FHRP-1、FHRP-2、FHRP-3 和 FHRP-4），選取含量多的 FHRP-1、FHRP-2 和 FHRP-3 作進(jìn)一步的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)分析，并通過(guò)小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 模型實(shí)驗(yàn)，研究其抗氧化和免疫活性。（3）通過(guò) Fe2+-H2O2降解方法降解粗多糖 FHRP，得到兩種分子量較小的降解多糖DFHRP-1 和 DFHRP-2，并研究其化學(xué)組成、初級(jí)結(jié)構(gòu)、功能特性、抗氧化活性和免疫活性的變化。1.5.3 技術(shù)路線

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 03040107101Wavenumber (cm-1)3456圖 2-5 FHRP 的紅外光譜圖Fig. 2-5 The IR spectrum of FHRP析于觀察多糖樣品的表面形態(tài)[89]。如圖 2-6 所示規(guī)則的碎片狀，而且樣品表面較粗糙，其表面相似[90]。當(dāng)提取方法不同時(shí)，多糖會(huì)呈現(xiàn)出不取法和超聲提取法提取了麥冬多糖，發(fā)現(xiàn)兩種得多糖的片狀更小,且出現(xiàn)很多小球狀顆粒及棒

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本文編號(hào)：2750202