【摘要】：本論文的內(nèi)容主要是研究大洋與南極樣品的真菌多樣性、采用尼羅紅與氯化三苯基四氮唑(TTC)方法進行產(chǎn)油真菌的初篩、采用氣相色譜方法對產(chǎn)油菌的脂肪酸成分進行分析及研究培養(yǎng)基成份對產(chǎn)油菌產(chǎn)油發(fā)酵的影響。主要結(jié)果如下:對中太平洋(6個站位)、南大西洋(2個站位)及西太平洋(22個站位)共30個站位的沉積物進行分離鑒定,一個獲得75株真菌,通過ITS鑒定結(jié)果顯示,這75株菌屬于14個屬,它們分別是:Aspergillus sp.(27株)、Penicillium sp.(21株)、Cladosporium sp.(8株)、Fusarium sp.(6株)、Alternaria(2株)、Exophiala sp.(2株)、Engyodontium sp.(2株)、Acremonium sp.(1株)、Nectria sp.(1株)、Tritirachium sp.(1株)、Aureobasidium sp.(1株)、Thielavia sp.(1株)、Lecythophora sp.(1株)、Sarocladium sp.(1株)。三個海區(qū)中菌株數(shù)量最多的為曲霉屬的真菌,可見曲霉屬真菌在這三個海區(qū)中為優(yōu)勢屬,其次為青霉屬。在太平洋中,枝孢屬的真菌也有一定的分布。其余屬均只有幾株,表明在三個大洋中分布較少。同時分別使用尼羅紅和TTC對大洋樣品中分離得到的369株真菌進行產(chǎn)油初篩,一共獲得61株產(chǎn)油菌,分別屬于10個屬:Aspergillus(21株)、Fusarium(13株)、Cladosporium(10株)、Penicillium(9株)、Engyodontium(2株)、Sarocladium(2株)、Alternaria(1株)、Aureobasidium(1株)、Lecythophora(1株)、Nectria(1株)。產(chǎn)油菌所占比例為18.70%。其中曲霉屬菌株占產(chǎn)油菌比例最高,為30.43%,其次為鐮刀屬菌株、枝孢屬菌株與青霉素菌株,分別占總產(chǎn)油菌屬的18.84%、14.49%與13.04%。對中國第29次南極科學(xué)考察獲得的南極普里茲灣海域23個站位的深海沉積物樣品進行了真菌分離培養(yǎng),共獲得了11個屬的21株真菌。分別是:Penicillium(9株)、Cladosporium(3株)、Acremonium(1株)、Aureobasidium(1株)、Botryotinia(1株)、Eurotiales(1株)、Exophiala(1株)、Fusarium(1株)、Nectria(1株)、Phoma(1株)、Sarocladium(1株)。南極普里茲灣海域的真菌多樣性較高,其中青霉屬菌株最多,占總菌株比例為42.85%,是普里茲灣真菌中的優(yōu)勢屬,其次為枝孢屬菌株,占總菌株比例為14.29%。分別用尼羅紅和TTC對南極普里茲灣海域分離得到的21株真菌進行產(chǎn)油初篩,共獲得8株產(chǎn)油菌,分別屬于7個屬:Penicillium(2株)、Aureobasidium(1株)、Cladosporium(1株)、Eurotiales(1株)、Exophiala(1株)、Fusarium(1株)、Sarocladium(1株)。產(chǎn)油菌占總菌株的比例為38%。對分離得到的產(chǎn)油菌進行脂肪酸分析,結(jié)果表明:這些產(chǎn)油菌所含的基本為C16-C18脂肪酸,不飽和脂肪酸含量較高,脂肪酸中具有較長的碳直鏈且沒有碳支鏈,因此可以作為生物柴油制備的原料油�？紤]到油脂生產(chǎn)成本,尋找可利用廉價底物高產(chǎn)油脂的微生物具有深遠(yuǎn)的意義。為了尋找能夠直接利用廉價底料作為碳源產(chǎn)油的真菌菌株,本文使用含有TTC的糖蜜培養(yǎng)基分離南極沉積物樣品,獲得一株產(chǎn)油菌,為P7-07-M1,屬名為:Nectria,該菌株可以直接利用糖蜜作為碳源發(fā)酵產(chǎn)油。對從南極產(chǎn)油菌中選擇一株產(chǎn)油菌(P7-07-M1),從大洋產(chǎn)油菌中選擇兩株產(chǎn)油菌(JL7KGC01A-M7與MP4CTD-11-M5)進行培養(yǎng)基優(yōu)化,結(jié)果顯示:菌株P(guān)7-07-M1達(dá)到最高產(chǎn)油量的時間為第8天,最適氮源和最適碳源分別為蛋白胨與葡萄糖,最適C/N比為168,最佳Cu SO4.5H2O濃度為0.0001g/L,最佳Mn SO4.H2O濃度為0.004g/L,通過培養(yǎng)基優(yōu)化,菌株P(guān)7-07-M1產(chǎn)油量提升了27.89%;菌株JL7KGC01A-M7達(dá)到最高產(chǎn)油量的時間為第7天,最適氮源和最適碳源分別為蛋白胨與葡萄糖,最適C/N比為140,最佳Cu SO4.5H2O濃度為0.0002g/L,最佳Mn SO4.H2O濃度為0.003g/L,通過培養(yǎng)基優(yōu)化,菌株JL7KGC01A-M7的產(chǎn)油量提升了30.15%;菌株MP4CTD-11-M5達(dá)到最高產(chǎn)油量的時間為第7天,最適氮源和最適碳源分別為蛋白胨與葡萄糖,最適C/N比為140,最佳Cu SO4.5H2O濃度為0.0001g/L,最佳Mn SO4.H2O濃度為0.004g/L,通過培養(yǎng)基優(yōu)化,菌株MP4CTD-11-M5的產(chǎn)油量提升了111.16%。菌株MP4CTD-11-M5培養(yǎng)基優(yōu)化效果最顯著。
【學(xué)位授予單位】：國家海洋局第三海洋研究所
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TQ929;Q93;TE667
【圖文】：

技術(shù)路線圖

圖 2-1 采樣地點示意圖Fig.2-1 Sketch map of collection sites2.1.2 主要試劑樣品稀釋液(Ringer Solution)NaCl 8.5 g/LKCl 0.3 g/LCaCl20.33 g/LTween 80 100 μL/L滅菌人工海水CTAB 抽提液（室溫保存）CTAB(十六烷基三乙基溴化銨) 2 %(w/v)NaCl 1.4 mol/LTris-HCl（pH 8.0） 100 mmol/L

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2734602