【摘要】：蜂糧是是蜜蜂在蜂巢中將采集到的花粉團咬碎后用蜂蠟封藏,在微生物的作用下,經(jīng)過一定時間的發(fā)酵形成蜂糧。本研究以天然蜂糧作為參考,分離并研究蜂糧中蜂花粉發(fā)酵含有的微生物,篩選獲得優(yōu)良發(fā)酵性能的菌株,并采用液態(tài)小型發(fā)酵罐進行發(fā)酵實驗。最后對人工蜂糧和天然蜂糧部分營養(yǎng)成分進行初步比對研究。主要研究結(jié)果如下:(1)以天然蜂糧作為參考,分離并研究蜂糧中含有的微生物,確認其分屬雜曲霉Aspergillus versicolor;米曲霉Aspergillus oryzae;紅酵母屬Rhodotorula;干酪乳桿菌鼠李糖亞種Lactobacillus rhamnosus;布氏乳桿菌Lactobacillus buchneri;植物乳桿菌Lactobacillus Plantarum;嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus;乳酸球菌Lactococcus garvieae;巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium。(2)對分離鑒定的菌5、6、7、8、9、10、12七種乳酸菌株進行產(chǎn)酸活性測試,通過測定培養(yǎng)液pH值和可滴定酸,菌8的產(chǎn)酸活性最強。測定乳酸菌的抑菌活性時,7株乳酸菌對金黃色葡萄球菌均存在有一定的抑制作用;菌6外的乳酸菌對大腸桿菌也存在有明顯的抑制作用;另外菌7對枯草芽孢桿菌表現(xiàn)有抑菌活性,而其余菌株對其無明細抑制作用。對指示真菌的抑菌活性具體為,菌6、7、8、12對啤酒酵母的抑制作用較強,其余菌株未檢測到對其的抑菌活性;菌5、6、8、10等對假絲酵母菌有抑制作用。綜合乳酸菌的產(chǎn)酸活性和抑菌活性,最終選擇菌8作為發(fā)酵性能優(yōu)良的乳酸菌株,并測定出該菌株最適生長溫度為35℃,pH值為6。(3)設計實驗優(yōu)化乳酸菌在小型液態(tài)發(fā)酵罐中的發(fā)酵條件。以乳酸菌活菌數(shù)、感官評分等試驗評價指標,確定發(fā)酵的接種方式為乳酸菌單獨發(fā)酵。以單因素試驗結(jié)果為基礎,對蜂糧液態(tài)發(fā)酵工藝進行響應面分析,通過求解乳酸菌活菌數(shù)(10~7cfu/g,以Y_1表示)與感官評分(Y_2)對自變量裝液量(A)、乳酸菌接種量(B)、發(fā)酵溫度(C)和攪拌轉(zhuǎn)速(D)的多元回歸方程,得到實際最優(yōu)提取條件為:裝液量(v/m)為8.4、乳酸菌接種量(v/v)為10.3、發(fā)酵溫度為33℃、攪拌轉(zhuǎn)速為436 r/min、發(fā)酵周期為4天。(4)通過檢測還原糖、總糖、粗脂肪、粗蛋白、α-氨基酸等指標評判人造蜂糧和天然蜂糧的營養(yǎng)價值,發(fā)酵后的人工蜂糧總糖增加了22.45%,粗脂肪降低了0.58%,粗蛋白增加2.18%,氨基酸總量增加0.49%,由此可以看出,花粉經(jīng)過發(fā)酵后,各種營養(yǎng)成分有了較大的改變。實驗采用SDS—PAGE電泳法,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵成為蜂糧后未見原花粉中相對分子量為23 kD的蛋白,由于有報道己分離并確定出致敏蛋白是一些相對分子質(zhì)量在20 kD~40 kD的酸性蛋白,因此一定程度地說明了發(fā)酵后花粉的致敏性蛋白被消除,但是需要在動物上進一步實驗才能加以驗證。
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：TQ920.1;Q93
【圖文】：

圖 2.1 天然蜂糧樣品菌落形態(tài)(A：孟加拉紅培養(yǎng)基；B：MRS 培養(yǎng)基；C：MC 培養(yǎng)基；D：LB 培養(yǎng)基)Fig.2.1 Colony morphology of natural bee bread samples(A: Bengal red medium; B: MRS medium; C: MC medium; D: LB medium)通過對天然蜂糧樣品中的菌種進行分離，涂板后觀察菌落形態(tài)特征，將不的菌落依次編號為菌 1~12。2.5.2 基因組提�。簩� 12 種初步分離的菌落提取基因組 DNA。

圖 2.2 菌落基因組電泳圖（1-12 泳道分別對應 1-12 號菌落編號；Marker: 1 kb DNAMarker）Fig.2.2 Colony genome electrophoretic diagram(Lanes 1-12 correspond to colonies number 1-12 respectively；Marker: 1 kb DNA Marker)結(jié)果：成功提取了 12 種菌落的基因組 DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?.5.3 特異性引物的 PCR 擴增：以 1-12 號菌的基因組作為模板，用 Its1 和 Its4 進行 1~4 號菌的 PCR 反應，引物 gyrb 進行 5~12 號菌的 PCR 反應，以期獲得清晰的特異性條帶，為后續(xù)研奠定基礎。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2725814