【摘要】：高平黃梨是山西著名特產(chǎn),高平素有梨鄉(xiāng)之稱,距今已有1 500年的栽培歷史,其個(gè)大、味濃、香甜適口,味道鮮美,各種維生素、礦物質(zhì)含量高,水分大、耐貯運(yùn)且含糖量很高。隨著梨汁加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,產(chǎn)生了越來越多的梨渣,梨渣中含有豐富的多糖,而多糖是生物體重要的生物活性物質(zhì),具有調(diào)節(jié)免疫力、抗氧化、抗腫瘤、降血脂降血糖等作用,因此梨渣可作為提取多糖的主要來源。本文以山西高平黃梨渣為原料,利用現(xiàn)代提取分離純化技術(shù),對黃梨渣多糖的提取工藝、分離純化、相對分子質(zhì)量、單糖組成及其基本結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步分析,并對其體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)作用和抗氧化能力進(jìn)行評價(jià),為今后黃梨渣的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供了參考價(jià)值。研究結(jié)果如下:(1)利用水浴醇沉法和超聲輔助法提取黃梨渣多糖,以多糖提取量為指標(biāo),分別進(jìn)行單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。水浴醇沉法得到最優(yōu)條件為:料液比1:35,溫度67℃,時(shí)間3.7h,在此條件下進(jìn)行三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)后測多糖提取量的平均值為56.15mg/g;超聲輔助法得到最優(yōu)條件為:料液比1:13,超聲時(shí)間60min,超聲功率132W,超聲溫度57℃,在此條件下進(jìn)行三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)后測多糖提取量的平均值為62.38mg/g,優(yōu)于水浴醇沉法,且超聲輔助提取法具有省時(shí)、高效、便于操作等優(yōu)點(diǎn),故綜合考慮選取超聲輔助法來提取黃梨渣多糖。(2)粗多糖經(jīng)過酶法和Sevag法聯(lián)合除蛋白,蛋白脫除率為75%且多糖損失率僅為24.71%,可達(dá)到簡化操作工藝、省時(shí)、最大限度去除蛋白質(zhì)的同時(shí)保證多糖得率的目的;H_2O_2法脫色率最高,可達(dá)78.56%,且多糖損失率最低,脫色效果好,操作簡單;脫蛋白、脫色、透析后的梨渣多糖經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析分離得到3個(gè)峰,表明梨渣多糖由3種不同組成的組分構(gòu)成,由于前兩種成分含量較少,故后續(xù)只對LPB-C進(jìn)行研究;多糖LPB-C經(jīng)過Sephadex G-100凝膠柱流出的曲線呈單一對稱峰,紫外光譜結(jié)果顯示多糖的特征吸收峰出現(xiàn)在225 nm波長處,260 nm和280 nm波長處沒有出現(xiàn)吸收峰,表明經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析純化后的多糖不含核酸和蛋白質(zhì)等雜質(zhì),且LPB-C經(jīng)凍融離心后沒有沉淀出現(xiàn),三種方法都證明LPB-C為相對分子質(zhì)量分布單一的組分,是一種較純的多糖。(3)經(jīng)測定,分離純化后分子質(zhì)量分布比較均一的梨渣多糖LPB-C的特性黏度[η]為1.11 cm~3/g,根據(jù)Mark-Houwink公式求得其黏均分子質(zhì)量為8.47×10~4 g/mol;將黃梨渣多糖衍生物的超高效液相色譜圖與混合標(biāo)準(zhǔn)單糖進(jìn)行對比,根據(jù)其出峰時(shí)間可以確定黃梨渣多糖中含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖和木糖,根據(jù)峰面積計(jì)算出4種單糖的物質(zhì)的量比為3.3:2.3:10.6:23.2;LPB-C的紅外光譜圖可以看出其具有多糖的特征吸收峰,可推測其是一種含有β糖苷鍵的吡喃型多糖。(4)建模成功后,給小鼠連續(xù)灌胃給藥15天,發(fā)現(xiàn)小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著升高;炭廓清能力隨著多糖濃度的升高而逐漸增強(qiáng),其中高劑量組小鼠吞噬指數(shù)的增加最為顯著;小鼠耳垂腫脹率明顯上升,說明黃梨渣多糖可使小鼠受抑制的DTH反應(yīng)恢復(fù),對細(xì)胞免疫功能具有促進(jìn)作用;經(jīng)治療的小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4三種細(xì)胞因子的分泌量均顯著增加,能夠有效地殺傷和抑制腫瘤細(xì)胞、抑制病毒復(fù)制、調(diào)節(jié)多種造血細(xì)胞;同時(shí)小鼠肝臟、心臟和腎臟三種組織器官中SOD、CAT、GSH-PX活力顯著增加,而脂質(zhì)過氧化物MDA水平降低,說明黃梨渣多糖可以提高免疫抑制小鼠的抗氧化能力。
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TS209;TQ281

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