研究背景近年,隨著核技術(shù)發(fā)展,電離輻射成為社會(huì)發(fā)展過程中的污染因素之一,而人體暴露于大劑量的電離輻射后會(huì)引發(fā)各種不良生物學(xué)效應(yīng),因此研制針對(duì)電離輻射損傷的輻射防護(hù)藥物便顯得十分重要。近來研究發(fā)現(xiàn),細(xì)菌自身的結(jié)構(gòu)成分（如脂多糖,鞭毛蛋白等）能夠抑制輻射導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡,增強(qiáng)機(jī)體對(duì)輻射的抵抗力。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)給予野生型小鼠TLR4配體細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide,簡(jiǎn)稱LPS）刺激后能提高小鼠對(duì)輻射的耐受。LPS是革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的主要成分之一,它能激活機(jī)體的免疫反應(yīng)。LPS雖有較好的抗輻射效應(yīng),但LPS會(huì)使感染的機(jī)體產(chǎn)生毒性反應(yīng)。我們通過預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選了大量LPS類似物,發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞趨化肽N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,簡(jiǎn)稱FMLP）可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生與LPS刺激類似的炎癥反應(yīng)。有文獻(xiàn)報(bào)道FMLP對(duì)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等細(xì)胞有重要作用,包括粘附,趨化和超氧化物陰離子釋放等。這提示FMLP可能通過影響細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能,從而具有潛在的輻射防護(hù)作用。基于以上研究背景,我們開展了FM... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

FMLP作用于體外細(xì)胞的毒性和活力檢測(cè)

海軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-20-和活力測(cè)試結(jié)果。B.小鼠體外BMC細(xì)胞毒性和活力測(cè)試結(jié)果。C.小鼠體外Spleencell細(xì)胞毒性和活力測(cè)試結(jié)果。*為P<0.05。2.FMLP與已知2種防護(hù)劑的毒性作用對(duì)比由于未能檢索到小鼠體內(nèi)FMLP毒性生存期實(shí)驗(yàn)的相關(guān)報(bào)道，為評(píng)估FMLP的防護(hù)效價(jià)，進(jìn)行小鼠體內(nèi)急性毒性實(shí)驗(yàn)。在本次實(shí)驗(yàn)中我們將FMLP與已被FDA批準(zhǔn)用于臨床的輻射防護(hù)劑WR-2721和本課題組前期發(fā)現(xiàn)的強(qiáng)效輻射防護(hù)劑LPS作對(duì)照研究，選用C57BL/6雄性小鼠（n=6）隨機(jī)分為NS對(duì)照組、FMLP給藥組、LPS給藥組和WR-2721給藥組（圖2），采取腹腔注射方式給予小鼠不同劑量梯度藥物，腹腔注射同等劑量的NS作為陰性對(duì)照組，觀察并記錄小鼠用藥后10天的生存狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FMLP毒性低于LPS，F(xiàn)MLP在用藥100mg/kg后，生存率達(dá)到100%，P<0.0001。FMLP毒性略高于WR-2721，但P=0.2836，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過計(jì)算得出FMLP的半致死劑量約在200-400mg/kg左右。圖2：LPS、WR-2721、NS與FMLP在小鼠體內(nèi)急性毒性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。C57BL/6雄性小鼠經(jīng)不同試劑處理后記錄其10天生存期。（二）FMLP體外細(xì)胞效應(yīng)研究1.FMLP促進(jìn)輻照后HIEC、BMC、Spleencell三種細(xì)胞的細(xì)胞活力為評(píng)價(jià)FMLP對(duì)體外細(xì)胞的輻射防護(hù)作用，我們采取HIEC細(xì)胞系、小鼠BMC和小鼠Spleencell三種細(xì)胞，通過CCK-8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)FMLP對(duì)輻照后細(xì)胞的輻射防護(hù)作用。將HIEC、BMC、Spleencell三種細(xì)胞分為給藥照射組和單純照射組，給藥照

FMLP電離輻射防護(hù)作用及其機(jī)制研究-21-射組于照射前12小時(shí)和2小時(shí)分別給予FMLP刺激細(xì)胞，隨后給予細(xì)胞照射，照射劑量為6.0Gy，12.0Gy，照后24小時(shí)通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力。根據(jù)HIEC、BMC、Spleencell細(xì)胞活力統(tǒng)計(jì)圖可以看出照射后各組細(xì)胞活力均有下降。但給藥照射組細(xì)胞活力均明顯高于單純照射組，說明FMLP可以增進(jìn)輻照后HIEC、BMC、Spleencell三種細(xì)胞的細(xì)胞活力。（圖3）。圖3.FMLP對(duì)照射后體外細(xì)胞的細(xì)胞活力檢測(cè)。在照前12小時(shí)和2小時(shí)用FMLP刺激給藥組細(xì)胞，隨后采用不同劑量（6.0Gy和12.0Gy）照射，照后24小時(shí)檢測(cè)給藥組和對(duì)照組細(xì)胞活力的變化。A.HIEC在不同劑量γ射線照射細(xì)胞活力的變化。B.BMC在不同劑量γ射線照射下細(xì)胞活力的變化。C.Spleencell在不同劑量γ射線照射下細(xì)胞活力的變化。*為P<0.052.FMLP體外輻射防護(hù)效果優(yōu)于同批次其它幾種輻射防護(hù)劑為比較FMLP體外輻射防護(hù)效果是否優(yōu)于其它輻射防護(hù)劑，選取多種常用的輻射防護(hù)劑（WR2721、IFN-α、GM-CSF、DMOG、LPS、PAM3、CPG-ODN、FMLP）作用于HIEC細(xì)胞系，其中生理鹽水作為陰性對(duì)照；WR2721、IFN-α、GM-SCF、DMOG都是國(guó)際上報(bào)道過的有效輻射防護(hù)劑，而LPS、PAM3、CPG-ODN是選自本教研室前期發(fā)現(xiàn)的輻射防護(hù)效果較好的防護(hù)劑。在試驗(yàn)中，于照前12小時(shí)和2小時(shí)分兩次用相應(yīng)藥物分別刺激HIEC，以12.0Gy劑量照射細(xì)胞，照后24小時(shí)采用CCK-8實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞活力情況進(jìn)行檢測(cè)。以未照射細(xì)胞系的細(xì)胞活力為100%，結(jié)果顯示FMLP對(duì)HIEC細(xì)胞系防護(hù)效果最好，相對(duì)細(xì)胞活力達(dá)到80%以上，該結(jié)果甚至優(yōu)于國(guó)際上已有報(bào)道和課題組前期研究的其它輻射防護(hù)劑（圖4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Inhibitory Effects of AURKB Gene on Apoptosis and Cancer Cell Growth in HCT 116 Cells[J]. Wangyuan ZENG,Wenxin DAI.  Medicinal Plant. 2019(06)
[2]甲酰肽受體2研究進(jìn)展[J]. 陳曉芳,樂穎影.  生命的化學(xué). 2016(06)
[3]保障核與輻射環(huán)境安全[J]. 夏琰君.  環(huán)境保護(hù). 2010(20)
[4]小腸電離輻射損傷研究進(jìn)展[J]. 馬曉飛,張紅.  原子核物理評(píng)論. 2010(03)
[5]甲酰肽受體研究進(jìn)展[J]. 程希遠(yuǎn),王明偉.  生命科學(xué). 2004(03)
[6]趨化肽fMLP增強(qiáng)博安霉素的抗腫瘤作用[J]. 李忠東,李毅,甄永蘇.  癌癥. 2002(08)
[7]核技術(shù)在國(guó)民經(jīng)濟(jì)中的應(yīng)用及其效益分析[J]. 隗斌賢.  嘉興高等專科學(xué)校學(xué)報(bào). 1998(Z1)

碩士論文
[1]中藥復(fù)方對(duì)急性輻射損傷小鼠睪丸的防護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究[D]. 王磊.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3146213