本文關(guān)鍵詞：肝臟為γδT細(xì)胞胸腺外發(fā)育場所的初步驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 肝臟 γδT細(xì)胞 T前體細(xì)胞 胸腺外發(fā)育 鼠傷寒桿菌

【摘要】：目的肝臟不僅是重要的代謝器官,而且也是一個(gè)免疫器官。肝臟中富含天然免疫細(xì)胞,其獨(dú)特的免疫細(xì)胞組成對于其功能特點(diǎn)的形成具有重要作用。許多研究表明,成年個(gè)體肝臟中含有造血干細(xì)胞,將其轉(zhuǎn)輸回體內(nèi)后能發(fā)育為各類免疫細(xì)胞,并且能長期維持。因此,成年肝臟也被認(rèn)為具有造血功能的器官,尤其是在骨髓造血功能受到破壞或抑制時(shí),其可能成為機(jī)體代償性造血的髓外造血器官。但該作用和機(jī)制尚需深入的研究和證實(shí)。肝臟獨(dú)特的造血功能是否會(huì)影響肝臟微環(huán)境中免疫細(xì)胞的組成和發(fā)育分化,該領(lǐng)域尚少有人涉足。肝臟免疫系統(tǒng)的特點(diǎn)之一是富含NKT、NK與γδ T細(xì)胞等天然免疫細(xì)胞。近年來的研究表明,肝臟中存在一群肝臟駐留的NK細(xì)胞,與經(jīng)典的NK細(xì)胞在表型、分布、功能與發(fā)育等方面存在巨大差異,認(rèn)為其可能由肝臟造血細(xì)胞發(fā)育而來。許多研究也表明,γδT細(xì)胞存在胸腺外發(fā)育途徑,小腸是其發(fā)育場所之一。鑒于γδT細(xì)胞在肝臟淋巴細(xì)胞中所占比例明顯高于脾臟、淋巴結(jié)及外周血,那么,肝臟是否也可能是γδ T細(xì)胞胸腺外發(fā)育場所,從而進(jìn)一步影響肝臟γδT細(xì)胞的組成?為了探討這些問題,本課題在確定肝臟相對于其他免疫器官富含γδT細(xì)胞的基礎(chǔ)上,從四個(gè)方面進(jìn)行了研究。首先,檢測比較了肝臟中CD4CD8雙陰性T前體細(xì)胞(DN1-DN4)的含量,觀察肝臟中T前體細(xì)胞含量變化的時(shí)間動(dòng)力學(xué)變化。發(fā)現(xiàn)肝臟的確存在T前體細(xì)胞,且以DN1和DN2細(xì)胞居多。其次,通過體外培養(yǎng)和過繼轉(zhuǎn)輸實(shí)驗(yàn),在功能上驗(yàn)證肝臟中T前體細(xì)胞是否具有向γδT細(xì)胞發(fā)育的潛能。再次,檢測了肝臟中是否含有向γδT細(xì)胞定向分化的γδT前體細(xì)胞,進(jìn)一步觀察其是否具有不同于胸腺γδT前體細(xì)胞的表型和功能特點(diǎn)。最后,通過γδ T細(xì)胞亞群的分布、細(xì)胞表型以及在鼠傷寒桿菌感染時(shí)應(yīng)答特點(diǎn),初步研究了肝臟γδT細(xì)胞的表型和功能特點(diǎn)。方法1、分離提取肝臟、小腸、、皮膚、胸腺、脾臟與淋巴結(jié)內(nèi)的單個(gè)核細(xì)胞,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測其中γδ T細(xì)胞的比例。2、通過PMA與離子霉素體外刺激,流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠肝臟、胸腺與脾臟中γδT17與γδT1細(xì)胞亞群組成的時(shí)間動(dòng)力學(xué)變化曲線。3、通過流式細(xì)胞術(shù)檢測各組織中T前體細(xì)胞的含量及肝臟中DN1-DN2的時(shí)相變化。4、通過流式細(xì)胞術(shù)檢測肝臟中γδ T前體細(xì)胞的表型、轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)與細(xì)胞因子的分泌。5、通過OP9-DL1誘導(dǎo)培養(yǎng)與過繼轉(zhuǎn)輸實(shí)驗(yàn),觀察肝臟或胸腺來源的T前體細(xì)胞向γδ T細(xì)胞發(fā)育的能力。6、通過灌胃感染建立鼠傷寒沙門氏菌感染模型,流式細(xì)胞術(shù)檢測肝臟γδ T細(xì)胞的活化與細(xì)胞因子的分泌情況。結(jié)果1、肝臟γδ T細(xì)胞的比例顯著高于胸腺、脾臟與淋巴結(jié)。γδ T17細(xì)胞的比例在胸腺中隨著周齡的增加逐漸下降,在脾臟與肝臟中則逐漸升高。胸腺與肝臟中γδ T1細(xì)胞的比例與周齡無明顯聯(lián)系,脾臟中隨著周齡的增加逐漸下降。2、與野生小鼠相比,無胸腺裸鼠肝臟中γδ T細(xì)胞雖然比例明顯下降,但仍存在一定數(shù)量的γδT細(xì)胞,且具有分泌細(xì)胞因子的能力；而脾臟中γδT細(xì)胞幾乎不存在。3、無胸腺裸鼠與野生小鼠肝臟中存在大量T前體細(xì)胞DN1與DN2細(xì)胞。DN2細(xì)胞從小鼠出生后第2周開始在肝臟中逐漸出現(xiàn),在第4周時(shí)其比例達(dá)到最高峰。與胸腺DN2細(xì)胞相比,肝臟DN2細(xì)胞高表達(dá)CD117、低表達(dá)CD90與CD25。4、成年小鼠肝臟中存在CD24hiCD73+γδT前體細(xì)胞,其比例隨著周齡增加逐漸升高。成年小鼠肝臟CD24hiCD73+γδ T前體細(xì)胞具有較強(qiáng)地分泌細(xì)胞因子的能力,高表達(dá)CD44、轉(zhuǎn)錄因子T-bet與RORγt,低表達(dá)CD27。5、通過與OP9-DL1細(xì)胞共孵育,肝臟來源的DN1細(xì)胞可以發(fā)育為γδ T細(xì)胞,且比例較胸腺來源的DN1或DN2細(xì)胞高。體內(nèi)過繼轉(zhuǎn)輸實(shí)驗(yàn)顯示,肝臟來源的DN2細(xì)胞可以發(fā)育為γδ T前體細(xì)胞與成熟γδT細(xì)胞。6、肝臟中γδ T細(xì)胞的表型特點(diǎn)是低表達(dá)CD27、高表達(dá)CD44。成年小鼠肝臟γδT細(xì)胞主要為γδ T17細(xì)胞,小腸γδT細(xì)胞以γδ T1細(xì)胞占優(yōu)勢,脾臟或胸腺中無亞群特異性分布。7、在鼠傷寒沙門氏菌感染第3天時(shí),肝臟中γδT細(xì)胞分泌IL-17a 的比例已明顯升高。在感染第5天時(shí),肝臟中γδ T細(xì)胞CD69表達(dá)明顯升高,且分泌IFN-γ的比例也明顯升高。結(jié)論1、除小腸與皮膚外,肝臟含有相對豐富的γδ T細(xì)胞。2、肝臟中存在γδ T前體細(xì)胞,且具有獨(dú)特表型和功能特點(diǎn)。3、肝臟T前體細(xì)胞DN1或DN2細(xì)胞具有向γδ T細(xì)胞發(fā)育的能力。肝臟可能為γδT細(xì)胞胸腺外發(fā)育分化的場所。4、肝臟γδT細(xì)胞具有獨(dú)特的表型、亞群分布和功能特點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：肝臟 γδT細(xì)胞 T前體細(xì)胞 胸腺外發(fā)育 鼠傷寒桿菌
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 主要符號說明15-17
• 文獻(xiàn)綜述17-34
• 一、T細(xì)胞的發(fā)育選擇假說17-20
• 1.1 預(yù)定向分化假說18-19
• 1.2 信號強(qiáng)度假說19-20
• 二、γδ T細(xì)胞亞群的分類20-23
• 2.1 根據(jù)TCRγ或δ鏈的使用進(jìn)行分類20-21
• 2.2 根據(jù)γδT細(xì)胞表型進(jìn)行分類21-22
• 2.3 根據(jù)γδT細(xì)胞的功能進(jìn)行分類22-23
• 三、γδT細(xì)胞獨(dú)特的發(fā)育調(diào)控機(jī)制23-27
• 3.1 微環(huán)境對γδT細(xì)胞發(fā)育的影響24
• 3.2 轉(zhuǎn)錄因子對γδT細(xì)胞發(fā)育的調(diào)控24-25
• 3.3 γδTCR信號強(qiáng)度對γδT細(xì)胞發(fā)育的調(diào)控25-27
• 參考文獻(xiàn)27-34
• 1 前言34-37
• 2 材料和方法37-42
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料37-39
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制與保存39-41
• 2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器41-42
• 3 主要實(shí)驗(yàn)方法42-48
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-75
• 4.1 肝臟含有相對豐富的γδT細(xì)胞,可能為γδT細(xì)胞胸腺外發(fā)育的場所48-53
• 4.2 肝臟存在T前體細(xì)胞,且該前體細(xì)胞具有不同于胸腺T前體細(xì)胞的表型53-59
• 4.3 肝臟存在γδ T前體細(xì)胞,且具有獨(dú)特的表型和功能特點(diǎn)59-65
• 4.4 肝臟T前體細(xì)胞向γδ T細(xì)胞發(fā)育分化的初步驗(yàn)證65-69
• 4.5 肝臟γδT細(xì)胞具有獨(dú)特的表型、亞群分布和功能特點(diǎn)69-75
• 5 討論75-81
• 6 總結(jié)及創(chuàng)新點(diǎn)81-82
• 參考文獻(xiàn)82-88
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果88-89
• 待發(fā)表的論文89-105
• 致謝105-106
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表106

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3 楊清明;6TG與6MP對急性淋巴細(xì)胞白血病的細(xì)胞毒作用比較[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;1995年04期

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6 何秉燕,李小明,王莉,張渝侯;TNF-α對K_(562)細(xì)胞細(xì)胞毒作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];醫(yī)學(xué)新知雜志;2000年03期

7 李勤,謝艷華,孫紀(jì)元,梁克明,張慶,王倩,王四旺;中藥安迪粉針劑對離體腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年04期

8 董靜,王其新;細(xì)胞毒性T細(xì)胞在白血病中的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2004年06期

9 賈國存;湯有才;李豐益;廖清奎;;HL-60細(xì)胞鐵池變化與凋亡相關(guān)基因關(guān)系的初步研究[J];中國小兒血液與腫瘤雜志;2007年05期

10 韓曉紅,蓋曉東,薛延軍;腫瘤細(xì)胞多藥耐藥逆轉(zhuǎn)研究[J];北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年01期

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1 朱君榮;陶宜富;;HZ08逆轉(zhuǎn)白血病K562/DOX細(xì)胞多藥耐藥性的實(shí)驗(yàn)研究[A];2010施慧達(dá)杯第十屆全國青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會(huì)論文集[C];2010年

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1 豐俊東；徐曉玉;中藥對腫瘤細(xì)胞MDR的逆轉(zhuǎn)作用[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

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4 楊啊晶;細(xì)胞存活分子影響力達(dá)霉素活性的機(jī)制[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

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8 李寧;短干涉RNA特異性抑制K562細(xì)胞肺耐藥相關(guān)蛋白基因表達(dá)的研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

9 梁越欣;力達(dá)霉素誘導(dǎo)細(xì)胞裂亡的分子機(jī)制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

10 彭智;腺病毒介導(dǎo)的SH2-DED融合肽抑制CML細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的效應(yīng)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

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1 劉靜;自體CIK細(xì)胞過繼性免疫治療肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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