本研究以Platinum,Sea Isle 2000,Salam,Supreme 4種海濱雀稗的根、莖、葉為材料,用無(wú)氮源的選擇性培養(yǎng)基、平板劃線法和顯微鏡檢測(cè)分離純化其內(nèi)生菌,結(jié)合乙炔還原法測(cè)定固氮酶活性,共分離篩選到55株具有固氮活性的內(nèi)生菌,通過(guò)SDS-PAGE及IS-PCR將這55株內(nèi)生固氮菌進(jìn)行聚類分析,并選取部分代表菌株進(jìn)行16S rDNA序列測(cè)定;同時(shí),選取固氮活性較高的菌株進(jìn)行溶磷性測(cè)定和表觀形態(tài)觀測(cè),并挑選2種代表菌株回接到黑麥草、柱花草和水稻中進(jìn)行促生效果驗(yàn)證,得出以下結(jié)果:(1)55株內(nèi)生固氮菌經(jīng)特異引物PCR擴(kuò)增,均得到約360 bp的nifH片段。測(cè)得固氮酶活性范圍在34.09～2948.08 nmol C2H2?mL-1?h-1之間,最大為Tt2 2948.08 nmol C2H2?mL-1?h-1,最小為Tt1 34.09 nmol C2H2?mL-1?h-1,不同菌株的固氮酶活性差別較大。(2)兩種方法將55株菌株分別聚為10類和11類,在SDS-PAGE中,將IS-PCR中的Group1和Group2聚為一個(gè)類群,而將Group3和Group4重新聚為兩...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1標(biāo)準(zhǔn)磷曲線

解于100mL水中，制成0.5%的溶液，另稱取鉬酸銨[(NH4)6Mo7O24·4H2O，F(xiàn)W：1235.86]10g,溶于450mL水，徐徐加入153mL濃硫酸中，邊加邊攪，再將0.5%酒石酸氧銻鉀溶液100mL加入到鉬酸銨溶液中，最后加水到1....

圖255株內(nèi)生固氮菌的nifH基因片段

3.3nifH片段的擴(kuò)增利用乙炔還原法篩選到55株來(lái)源于海濱雀稗的內(nèi)生固氮菌，需要在DNA分子水平上通過(guò)PCR擴(kuò)增進(jìn)一步檢測(cè)編碼固氮酶的nifH基因（圖2）。結(jié)果55個(gè)菌株均能擴(kuò)增出約360bp的nifH基因片段。a

圖4內(nèi)生固氮菌的蛋白電泳聚類結(jié)果

24圖4內(nèi)生固氮菌的蛋白電泳聚類結(jié)果圖4中在80%以上的水平上共得到10個(gè)不同的類群。如圖中所示：類群I（Zl2，Tl2，Tr2，Sr1，Sr3，St3，Sl1，Sr5）、類群II（Tt3，Tt5，Tr10，Tt4，Tt2，Tt6，Zr5，Zr6)、類群II....

圖555株內(nèi)生固氮菌IS-PCR指紋圖譜

26注：a為Group1的指紋圖譜；b為Group8、Group9和Group10的指紋圖譜；c為Group7、Group5和Group6的指紋圖譜；d為Group2、Group11、Group3和Group4的指紋圖譜；M為marker。圖....

本文編號(hào)：4024867