番茄黃化曲葉病是影響番茄生產(chǎn)的嚴重病害,該病是由雙生病毒科番茄黃化曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)引起。番茄一旦感染了黃化曲葉病,葉片就會出現(xiàn)卷曲皺縮,黃化等癥狀,進而導(dǎo)致坐果率下降,番茄嚴重減產(chǎn),并且品質(zhì)也會下降。番茄栽培種中缺乏抗黃化曲葉病毒的抗性基因,僅在近緣野生番茄品種中發(fā)現(xiàn)了Ty-1,Ty-2,Ty-3,Ty-4,Ty-5等抗性位點。Ty-2是抗病效果最好的一個基因。目前抗病品種的選育是通過近緣野生種和栽培種雜交,將抗病基因轉(zhuǎn)育到栽培品種中。我們對含有抗性位點Ty-2的番茄材料CLN2777A和感病材料4840進行轉(zhuǎn)錄組差異分析,發(fā)現(xiàn)TYLCV侵染后,Le ACT1在抗病材料中表達上調(diào),而在感病材料中其表達下降,推測該基因可能參與了抗病過程。本研究首先利用RT-PCR克隆該基因,并對其進行生物信息學(xué)分析。然后通過熒光定量RT-PCR對其進行組織表達以及誘導(dǎo)表達差異分析。同時利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)以及轉(zhuǎn)基因過表達對Le ACT1進行功能分析。另外,利用煙草瞬時侵染對Le ACT1的啟動子進行表達特征分析。最后,測定了...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1LeACT1啟動子的相似性比較

圖1LeACT1啟動子的相似性比較。圖注：CLN2777A為抗病材料，TMXA48-4-0為感病材料，reference為參考基因組。Fig.1ThesimilaritycomparisonofthepromoterofLeACT1.

圖2LeACT1的結(jié)構(gòu)域預(yù)測

圖2LeACT1的結(jié)構(gòu)域預(yù)測。Fig.2ThepredictionofproteindomainofLeACT1eACT1進化樹分析用番茄LeACT1的氨基酸序列，在NCBI數(shù)據(jù)庫（http://www.n

圖4LeACT1的進化樹分析

圖4LeACT1的進化樹分析Fig.4ThephylogenetictreeofLeACT1

圖5GUS染色及GUS定量圖

啟動子（圖5C）。進一步提取抗感材料注射點的煙草RNA，反T-PCR分析。擴增結(jié)果證明了GUS定量的結(jié)果，其中抗病材著（圖5B），而感病材料中TYLCV相關(guān)基因?qū)ζ鋯幼拥囊制剑▓D5D）。pLeACT1響應(yīng)TYLCV相關(guān)基因，進一步證明抗性密切相關(guān)。

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