發(fā)布時(shí)間：2023-12-05 19:06

　　開(kāi)花是植物生命活動(dòng)過(guò)程中一個(gè)重要而復(fù)雜的過(guò)程,植物能感應(yīng)環(huán)境因子的改變,并結(jié)合自身遺傳因子做出相應(yīng)的發(fā)育調(diào)控,以便在合適的環(huán)境條件下做出花的發(fā)育,從而最大可能的獲取生存和繁殖后代的機(jī)會(huì)。這就使植物利用環(huán)境及遺傳因子調(diào)控植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)到生殖生長(zhǎng)(即開(kāi)花)的轉(zhuǎn)變顯得尤為重要,晚開(kāi)花可能讓植物生長(zhǎng)得更加強(qiáng)壯,但不利于種子的產(chǎn)生;相對(duì)的,早開(kāi)花不能保證植物有足夠的能量?jī)?chǔ)備來(lái)繁衍后代,由此可知開(kāi)花時(shí)間的早晚關(guān)系到植物種子的形成,從而影響到植物種族的延續(xù)。影響植物開(kāi)花的因素很多,包含環(huán)境因子和遺傳因子,植物能通過(guò)多種遺傳途徑來(lái)對(duì)外界環(huán)境和植物內(nèi)環(huán)境做出相應(yīng)的反應(yīng),這些遺傳途徑復(fù)雜而精確地調(diào)控植物開(kāi)花。遺傳途徑中涉及到多種調(diào)控花發(fā)育的基因整合子,包括促進(jìn)開(kāi)花的基因LEAFY、FT、SOC1、CO以及開(kāi)花抑制基因FLC、SVP、FLM等。這些基因編碼的蛋白大都屬于于MADS-Like蛋白,如SCO1、AGL24、SVP等,它們能直接或間接的調(diào)控開(kāi)花。有關(guān)SOC1、AGL24、SVP等蛋白的作用機(jī)制目前被廣泛研究,其調(diào)控機(jī)制以及蛋白間的相互作用已經(jīng)比較清楚。芥菜(Brassica juncea Coss)...

【文章頁(yè)數(shù)】：144 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物開(kāi)花研究進(jìn)展
        1.1.1 春化途徑和自主途徑調(diào)控開(kāi)花
        1.1.2 光周期和赤霉素對(duì)開(kāi)花的影響
        1.1.3 溫度對(duì)植物開(kāi)花的影響
    1.2 MADS-box蛋白家族
    1.3 花器官發(fā)育模型
    1.4 AGL6-Like基因研究進(jìn)展
    1.5 AGL15-Like基因研究進(jìn)展
    1.6 蛋白相互作用研究方法
        1.6.1 酵母雙雜交
        1.6.2 雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)(BiFC)
    1.7 DNA與蛋白互作研究方法
        1.7.1 酵母單雜交技術(shù)
        1.7.2 雙螢光素酶法
第二章引言
第三章 芥菜AGL6、AGL15及AGL15啟動(dòng)子的克隆及生物分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌種及載體
        3.1.3 試驗(yàn)試劑
        3.1.4 主要試驗(yàn)儀器
    3.2 方法
        3.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        3.2.2 總RNA提取(TRIZOL? Reagent)
        3.2.3 總RNA的反轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 芥菜基因組DNA的提取
        3.2.5 PCR目的條帶的回收(OMEGA Gel Extraction kit)
        3.2.6 質(zhì)粒提取(OMEGA Plasmid Mini Kit)
        3.2.7 陽(yáng)性克隆的確定
        3.2.8 引物設(shè)計(jì)
        3.2.9 芥菜AGL6、AGL15的cDNA與DNA特異性PCR擴(kuò)增
        3.2.10 芥菜AGL15啟動(dòng)子克隆
        3.2.11 生物信息學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 芥菜總RNA和DNA的提取
        3.3.2 芥菜AGL6、AGL15的cDNA克隆
        3.3.3 芥菜AGL6、AGL15的DNA克隆
        3.3.4 芥菜AGL6的序列分析
        3.3.5 芥菜AGL15的序列分析
        3.3.6 AGL15啟動(dòng)子的克隆
        3.3.7 AGL15啟動(dòng)子的分析
第四章 芥菜AGL6、AGL15蛋白與SOC1、AGL24、SVP的蛋白互作研究
    4.1 材料
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 菌種及載體
        4.1.3 試驗(yàn)試劑
        4.1.4 試驗(yàn)儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        4.2.2 酵母雙雜交檢測(cè) AGL6、AGL15 與 SOC1、SVP、AGL24 蛋白互作
        4.2.3 BiFC檢測(cè)AGL6、AGL15與SOC1、SVP、AGL24蛋白互作
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.3.2 酵母重組質(zhì)粒的自激活及毒性檢測(cè)
        4.3.3 BiFC重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3.4 酵母雙雜交鑒定蛋白相互作用
        4.3.5 BiFC鑒定蛋白間的相互作用
第五章 芥菜AGL6氨基酸敲除突變體與SOC1、AGL24、SVP的蛋白互作研究
    5.1 材料
    5.2 方法
        5.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        5.2.2 AGL6蛋白相互作用位點(diǎn)的預(yù)測(cè)
        5.2.3 AGL6基因突變體的引物設(shè)計(jì)
        5.2.4 AGL6基因突變體構(gòu)建
        5.2.5 AGL6突變體的酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.6 AGL6突變體的BiFC載體的構(gòu)建
        5.2.7 蛋白互作檢測(cè)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 AGL6突變體的構(gòu)建
        5.3.2 AGL6氨基酸敲除突變載體構(gòu)建
        5.3.3 AGL6氨基酸敲除突變體與SOC1、AGL24、SVP的互作
第六章 芥菜AGL15氨基酸敲除突變體與AGL24的蛋白互作
    6.1 材料
    6.2 方法
        6.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        6.2.2 AGL15蛋白互作位點(diǎn)的預(yù)測(cè)
        6.2.3 AGL15氨基酸敲除突變體引物設(shè)計(jì)
        6.2.4 AGL15突變體酵母和BiFC重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        6.2.5 AGL6突變體蛋白互作
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 AGL15突變體的酵母表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        6.3.2 AGL15突變體的BiFC重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        6.3.3 蛋白互作鑒定
第七章 芥菜AGL15啟動(dòng)子與SOC1、AGL24、AGL6、AGL15蛋白的相互作用
    7.1 材料
        7.1.1 菌株與載體
        7.1.2 試驗(yàn)試劑
        7.1.3 試驗(yàn)儀器
    7.2 試驗(yàn)方法
        7.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        7.2.2 AGL15啟動(dòng)子表達(dá)載體的構(gòu)建
        7.2.3 酵母單雜交檢測(cè)AGL15啟動(dòng)子與SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白互作
        7.2.4 雙螢光素酶檢測(cè)AGL15啟動(dòng)子與SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白互作
    7.3 結(jié)果與分析
        7.3.1 酵母單雜交表達(dá)載體的構(gòu)建
        7.3.2 雙螢光素表達(dá)載體構(gòu)建
        7.3.3 AGL15啟動(dòng)子與SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白的相互作用
第八章 討論
第九章 結(jié)論
    9.1 成功克隆芥菜AGL6、AGL15基因
    9.2 獲得芥菜AGL15的啟動(dòng)子
    9.3 芥菜AGL6能與SOC1、AGL24、SVP蛋白互作
    9.4 芥菜AGL15不能與SOC1、SVP、AGL6互作，能與AGL24互作
    9.5 芥菜AGL6氨基酸敲除突變體與SOC1、AGL24、SVP互作鑒定
    9.6 芥菜AGL15氨基酸敲除突變體與AGL24蛋白的相互鑒定
    9.7 芥菜AGL15啟動(dòng)子能與蛋白SOC1、AGL24、AGL15蛋白互作
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
項(xiàng)目資助
在校期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3870721