由于篤斯越橘果實(shí)營養(yǎng)價(jià)值較高、風(fēng)味較好,又是重要的藍(lán)莓野生資源,所以,近年來對篤斯越橘的研究越來越受到關(guān)注,但目前關(guān)于篤斯越橘的研究主要集中在馴化栽培、營養(yǎng)價(jià)值分析、抗寒分子機(jī)理等方面,而對其種質(zhì)資源保護(hù)及保存方面的相關(guān)研究較少。組織培養(yǎng)是種質(zhì)資源保存的一種重要方法。本試驗(yàn)以篤斯越橘優(yōu)系SL-1單芽莖段為外植體材料,優(yōu)化了SL-1的擴(kuò)增體系;以篤斯越橘優(yōu)系SL-1組培小苗為材料,探討了保存溫度、保存培養(yǎng)基、保存時間及保存條件對組培苗生長情況、成活率和復(fù)壯率的影響,并對復(fù)壯前后的低溫保存組培苗進(jìn)行了基因組DNA甲基化的MSAP技術(shù)分析,旨在建立一套完整的篤斯越橘組培苗低溫保存體系,為以后的基因工程和分子育種奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。主要的結(jié)果如下:(1)篤斯越橘優(yōu)系的單芽莖段最佳誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+TDZ0.5 mg/L+ZT2.0mg/L;單芽莖段最佳誘導(dǎo)分化苗培養(yǎng)基為:WPM+ZT3.0 mg/L+IBA0.3 mg/L;單芽莖段擴(kuò)繁的最佳pH值為5.2;單芽莖段擴(kuò)繁的最佳光照時間為14 h/d。(2)篤斯越橘優(yōu)系組培苗最佳低溫保存培養(yǎng)基為:WPM培養(yǎng)基+山梨醇20 g/L+蔗糖20...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 藍(lán)莓種質(zhì)資源現(xiàn)狀
    1.2 藍(lán)莓組織培養(yǎng)現(xiàn)狀
    1.3 種質(zhì)資源組織培養(yǎng)保存研究進(jìn)展
    1.4 植物低溫保存中生理調(diào)控機(jī)制
        1.4.1 低溫保存對植物組織細(xì)胞膜透性的影響
        1.4.2 低溫保存中植物組織葉綠體色素含量的變化
        1.4.3 低溫保存中植物組織含水量的變化
        1.4.4 低溫保存中植物組織滲透性調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的變化
        1.4.5 低溫保存中植物組織淀粉含量的變化
        1.4.6 低溫保存中植物組織保護(hù)酶活性的變化
    1.5 基因組DNA甲基化的MSAP技術(shù)
        1.5.1 MSAP技術(shù)原理
        1.5.2 MSAP技術(shù)的應(yīng)用
    1.6 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 組培苗的培養(yǎng)
        2.2.2 培養(yǎng)基和生長調(diào)節(jié)劑的配置方法
        2.2.3 單芽莖段擴(kuò)繁培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
        2.2.4 組培苗低溫保存培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
        2.2.5 生長情況調(diào)查統(tǒng)計(jì)方法
        2.2.6 低溫保存中植株生理生化指標(biāo)的檢測方法
        2.2.7 低溫保存后植株的復(fù)壯方法
        2.2.8 低溫保存前后組培苗基因組DNA的甲基化MSAP檢測方法
        2.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件對單芽莖段誘導(dǎo)分化的影響
        3.1.1 生長調(diào)節(jié)劑TDZ、ZT、IBA對單芽莖段組織誘導(dǎo)分化的影響
        3.1.2 蔗糖對單芽莖段芽分化的影響
        3.1.3 光照時間對單芽莖段分化的影響
        3.1.4 pH值對單芽莖段分化的影響
    3.2 低溫保存的溫度、培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境的篩選
        3.2.1 低溫保存溫度的篩選
        3.2.2 低溫保存中WPM和蔗糖濃度的篩選
        3.2.3 低溫保存中培養(yǎng)基中添加滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的篩選
        3.2.4 光照時間對低溫保存的影響
    3.3 低溫保存中篤斯越橘優(yōu)系的植物學(xué)特征和生理生化變化
        3.3.1 植物學(xué)特征的變化
        3.3.2 組織含水量的變化
        3.3.3 膜透性的變化
        3.3.4 葉綠體色素含量的變化
        3.3.5 滲透性調(diào)節(jié)物質(zhì)的變化
        3.3.6 可溶性淀粉含量的變化
        3.3.7 保護(hù)酶活性的變化
        3.3.8 低溫條件下篤斯越橘優(yōu)系生理生化指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)矩陣分析
    3.4 篤斯越橘優(yōu)系組培苗低溫保存后的復(fù)壯
    3.5 基因組DNA的 MSAP技術(shù)分析
        3.5.1 篤斯越橘優(yōu)系基因組DNA的提取
        3.5.2 連接產(chǎn)物的預(yù)擴(kuò)增
        3.5.3 選擇性PCR擴(kuò)增
        3.5.4 CCGG位點(diǎn)甲基化水平分析
4 討論
    4.1 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件對外植體增殖的影響
    4.2 添加滲透調(diào)節(jié)類物質(zhì)對組培苗低溫保存的影響
    4.3 低溫保存過程中的影響因素及生理生化檢測
    4.4 低溫保存中基因組DNA甲基化水平及模式變化
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3846159