藍(lán)莓是重要經(jīng)濟(jì)作物,近年來(lái),在山東、遼寧等北方地區(qū)種植面積不斷擴(kuò)大。由于藍(lán)莓根系不發(fā)達(dá)、吸收養(yǎng)分能力差,喜好偏酸土壤環(huán)境、適宜土壤pH為4.5-5.5,制約了藍(lán)莓生產(chǎn)。植物根際促生菌(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria,PGPR)具有促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)發(fā)育、調(diào)控和改善根際土壤環(huán)境、防治土傳病害等多種作用。本研究從藍(lán)莓根際篩選生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌、蛋白酶產(chǎn)生菌、產(chǎn)酸菌及溶磷細(xì)菌等,并進(jìn)行鑒定;通過(guò)營(yíng)養(yǎng)缽苗和穴盤(pán)苗盆栽試驗(yàn)驗(yàn)證其促生效果;運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)探究BIA070和BPR176菌株對(duì)根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響;對(duì)BIA070菌株進(jìn)行GFP標(biāo)記,探究其根際定殖能力;研究產(chǎn)酸菌對(duì)土壤pH的影響。為藍(lán)莓專用PGPR微生物肥料研制與推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。從藍(lán)莓根際篩選到生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌14株、蛋白酶產(chǎn)生菌12株、溶磷細(xì)菌6株。通過(guò)穴盤(pán)苗試驗(yàn)和營(yíng)養(yǎng)缽苗試驗(yàn),初步確定了10株促生效果較好的菌株,鑒定結(jié)果顯示:BIA032屬于Leucobacter aridicollis,BIA044、BIA088、BPR082、BPR088、BPR176屬于阿氏芽孢桿菌(Bacillus...

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 研究背景
        1.1.1 藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.2 藍(lán)莓栽培中存在的問(wèn)題
    1.2 植物根際促生菌在藍(lán)莓土壤改良中的應(yīng)用前景
        1.2.1 微生物在藍(lán)莓中的應(yīng)用研究進(jìn)展
        1.2.2 植物根際促生菌（PGPR）
            1.2.2.1 PGPR的發(fā)展歷史
            1.2.2.2 PGPR作用機(jī)制
            1.2.2.3 PGPR的應(yīng)用
    1.3 土壤肥力
        1.3.1 土壤酶
        1.3.2 土壤養(yǎng)分
        1.3.3 土壤微生物群落結(jié)構(gòu)
    1.4 本研究的立項(xiàng)依據(jù)、研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線
        1.4.1 立項(xiàng)依據(jù)
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 主要儀器
    2.2 培養(yǎng)基
        2.2.1 菌株發(fā)酵、培養(yǎng)基本培養(yǎng)基
        2.2.2 生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌篩選培養(yǎng)基
        2.2.3 溶磷菌篩選培養(yǎng)基
        2.2.4 蛋白酶產(chǎn)生菌篩選培養(yǎng)基
        2.2.5 產(chǎn)酸菌篩選培養(yǎng)基
    2.3 方法
        2.3.1 根際促生細(xì)菌的分離、純化
        2.3.2 生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌的篩選
            2.3.2.1 IAA產(chǎn)生菌初篩
            2.3.2.2 細(xì)菌分泌IAA定量測(cè)定
        2.3.3 溶磷菌的篩選
            2.3.3.1 溶磷菌初篩
            2.3.3.2 溶磷菌發(fā)酵液有效磷含量測(cè)定
        2.3.4 蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選
            2.3.4.1 蛋白酶產(chǎn)生菌初篩
            2.3.4.2 蛋白酶產(chǎn)生菌復(fù)篩
        2.3.5 根際促生菌菌種鑒定
            2.3.5.1 菌株形態(tài)特征及生理生化特征測(cè)定
            2.3.5.2 細(xì)菌基因組DNA的提取
            2.3.5.3 16S rDNA擴(kuò)增
        2.3.6 藍(lán)莓根際促生菌促生效果驗(yàn)證
            2.3.6.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3.6.2 植株生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定
            2.3.6.3 植株葉片相關(guān)指標(biāo)測(cè)定
            2.3.6.4 植株養(yǎng)分測(cè)定
            2.3.6.5 根際土壤酶活及養(yǎng)分測(cè)定
            2.3.6.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
        2.3.7 促生菌對(duì)根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響
        2.3.8 促生菌根際定殖能力研究
            2.3.8.1 GFP標(biāo)記
            2.3.8.2 標(biāo)記菌株質(zhì)粒穩(wěn)定性測(cè)定
            2.3.8.3 盆栽試驗(yàn)探究BIA070根際定殖能力
        2.3.9 藍(lán)莓根際產(chǎn)酸菌的篩選
            2.3.9.1 土壤樣品采集
            2.3.9.2 產(chǎn)酸菌的分離純化
            2.3.9.3 產(chǎn)酸能力測(cè)定
            2.3.9.4 產(chǎn)酸菌菌種鑒定
            2.3.9.5 高效液相色譜測(cè)定有機(jī)酸種類及含量
            2.3.9.6 土壤培養(yǎng)試驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 藍(lán)莓根際促生菌的篩選
        3.1.1 生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌
        3.1.2 溶磷菌
            3.1.2.1 溶磷菌初篩
            3.1.2.2 溶磷菌發(fā)酵液有效磷含量
        3.1.3 蛋白酶產(chǎn)生菌
    3.2 藍(lán)莓根際促生菌菌種鑒定
        3.2.1 菌體及菌落形態(tài)
        3.2.2 促生菌生理生化特征
        3.2.3 16SrDNA基因序列分析
    3.3 藍(lán)莓根際促生菌促生效果
        3.3.1 藍(lán)莓營(yíng)養(yǎng)缽苗試驗(yàn)調(diào)查
            3.3.1.1 生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌
            3.3.1.2 蛋白酶產(chǎn)生菌
            3.3.1.3 溶磷菌
            3.3.1.4 營(yíng)養(yǎng)缽苗試驗(yàn)
        3.3.2 穴盤(pán)苗試驗(yàn)調(diào)查
            3.3.2.1 2015 年7月 6 日調(diào)查結(jié)果
            3.3.2.2 2015 年7月 30 日調(diào)查結(jié)果
            3.3.2.3 2015 年11月 12 日調(diào)查結(jié)果
        3.3.3 第二次營(yíng)養(yǎng)缽苗試驗(yàn)結(jié)果
            3.3.3.1 植株生長(zhǎng)狀況
            3.3.3.2 土壤理化性質(zhì)
    3.4 促生菌對(duì)藍(lán)莓根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響
        3.4.1 細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)分析
            3.4.1.1 OTU聚類
            3.4.1.2 Alpha多樣性分析
            3.4.1.3 群落結(jié)構(gòu)分析
            3.4.1.4 群落功能基因預(yù)測(cè)分析
        3.4.2 真菌群落結(jié)構(gòu)分析
            3.4.2.1 OTU聚類
            3.4.2.2 Alpha多樣性分析
            3.4.2.3 群落結(jié)構(gòu)分析
    3.5 藍(lán)莓根際促生菌BIA070的根際定殖能力研究
    3.6 藍(lán)莓根際產(chǎn)酸菌篩選
        3.6.1 初篩
        3.6.2 發(fā)酵液pH測(cè)定
        3.6.3 菌種鑒定
            3.6.3.1 菌落形態(tài)特征
            3.6.3.2 產(chǎn)酸菌生理生化特征
            3.6.3.3 產(chǎn)酸菌 16S rDNA序列比對(duì)
        3.6.4 發(fā)酵液有機(jī)酸種類及含量
            3.6.4.1 標(biāo)樣信息
            3.6.4.2 測(cè)定結(jié)果
        3.6.5 產(chǎn)酸菌土壤培養(yǎng)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3846323