葡萄扇葉病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)引起的葡萄扇葉病是全世界范圍內(nèi)最嚴(yán)重的葡萄病毒病害之一。GFLV可導(dǎo)致葡萄產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降,并且縮短葡萄園的使用壽命。我國對葡萄扇葉病的研究較晚,1980年首次在新疆發(fā)現(xiàn),至今未獲得中國GFLV分離物的全基因組序列。為了建立穩(wěn)定、可靠、快速、靈敏的GFLV分子生物學(xué)檢測方法,并調(diào)查GFLV在我國的發(fā)生分布情況以及分子變異特點,本研究針對GFLV開展了巢式RT-PCR、實時熒光定量RT-PCR分子檢測技術(shù)研究,對來自全國19個省、市、自治區(qū)的376株葡萄樣品進行GFLV檢測,以克隆測序得到的部分移動蛋白(movement protein,MP)和外殼蛋白(coat protein,CP)基因序列進行變異分析,并展開GFLV全基因組序列擴增,主要取得了以下研究結(jié)果:根據(jù)GFLV的MP和CP基因分別設(shè)計引物,研究建立了GFLV的巣式RT-PCR,該方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠,與常規(guī)RT-PCR相比,具有較高的靈敏度,其中巣式引物FL-MPn1檢測效果較好。另外,通過引物選擇、條件優(yōu)化和擴增效率比較,建立了以FL-HP1為引物...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 葡萄病毒種類
    1.2 葡萄扇葉病簡介
        1.2.1 葡萄扇葉病
        1.2.2 葡萄扇葉病癥狀及危害
        1.2.3 葡萄扇葉病在我國的發(fā)生情況
        1.2.4 扇葉病毒的傳播途徑
        1.2.5 葡萄扇葉病病原
    1.3 葡萄扇葉病毒檢測方法
        1.3.1 田間癥狀觀察
        1.3.2 電鏡觀察
        1.3.3 生物學(xué)檢測
        1.3.4 血清學(xué)檢測
        1.3.5 分子生物學(xué)檢測
    1.4 葡萄扇葉病防治
    1.5 研究展望
    1.6 研究目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 植物材料與試劑
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試劑
        2.1.3 引物
        2.1.4 實驗所用儀器
    2.2 研究方法
        2.2.1 植物材料的采集
        2.2.2 總RNA提取和c DNA合成
        2.2.3 GFLV檢測體系
        2.2.4 GFLV全基因組擴增
        2.2.5 PCR產(chǎn)物的克隆與測序
        2.2.6 序列分析
        2.2.7 草本指示植物摩擦接種
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 GFLV巢式PCR檢測
        3.1.1 總RNA提取
        3.1.2 兩套巢式PCR引物檢測效果比較
        3.1.3 葡萄不同部位巢式PCR檢測結(jié)果
        3.1.4 GFLV巢式PCR檢測結(jié)果
    3.2 GFLV熒光定量PCR的檢測
        3.2.1 引物的特異性
        3.2.2 實時熒光定量RT-PCR反應(yīng)條件優(yōu)化
        3.2.3 擴增效率的比較
        3.2.4 靈敏度比較
        3.2.5 重復(fù)性檢測結(jié)果
        3.2.6 內(nèi)參基因的穩(wěn)定性
        3.2.7 不同樣品間GFLV相對含量的比較
        3.2.8 同一葡萄樣品不同部位相對含量比較
        3.2.9 田間葡萄樣品實時熒光定量檢測
    3.3 GFLV MP、CP序列分析
        3.3.1 樣品選擇
        3.3.2 GFLV分離物多樣性分析
        3.3.3 GFLV分離物重組和進化樹分析
        3.3.4 GFLV分離物的遺傳分化和基因漂移分析
    3.4 GFLV全基因組序列擴增與分析
        3.4.1 GFLV全基因組序列擴增
        3.4.2 GFLV-SDHN分離物多樣性分析
        3.4.3 GFLV-SDHN分離物進化樹分析
        3.4.4 GFLV-SDHN分離物重組分析
        3.4.5 GFLV-SDHN摩擦接種草本指示植物
第四章 討論
    4.1 GFLV巢式RT-PCR檢測效果
    4.2 GFLV實時熒光定量RT-PCR檢測效果
    4.3 我國GFLV MP、CP序列多樣性
    4.4 GFLV-SDHN的起源與進化
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3784016