發(fā)布時間：2022-07-03 20:14

　　為探明中國水仙花（Narcissus tazetta var.Cihensis Roem）類黃酮物質組分與代謝機制,本研究以中國水仙花不同發(fā)育階段的花瓣和副冠為材料,利用非酸水解法提取類黃酮物質,結合HPLC-MSn技術,對不同發(fā)育時期的中國水仙花類黃酮物質進行定性定量分析,同時采用表達譜分析和熒光定量PCR分析,對其類黃酮合成途徑進行研究,得到的主要結果如下:1建立了中國水仙花類黃酮物質提取與鑒定技術以中國水仙三年生種球盛花期花瓣為材料,比較非酸水解法和酸水解法提取得到的類黃酮物質,并用高效液相色譜與多級質譜聯(lián)用（HPLC-MSn）技術進行鑒定,比較了兩種提取方法的優(yōu)缺點、篩選了 HPLC-MSn的流動相體系。結果表明,在同一 HPLC-MSn流動相體系及梯度洗脫條件下酸水解法提取鑒定得到了綠原酸、槲皮素和異鼠李素;非酸水解法提取鑒定得到了綠原酸、蘆丁和水仙苷。槲皮素和異鼠李素分別是蘆丁和水仙苷的苷元,鑒于非酸水解法提取得到的黃酮苷經HPLC-MSm技術鑒定能提供更豐富的結構信息（糖苷鍵結合位置、糖苷種類）,所以選擇非酸解法為后續(xù)試驗的提取方法。比較了 1%乙酸-甲醇和1%乙酸-乙睛... 

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 前言
    1 中國水仙概況
        1.1 中國水仙起源與分布
        1.2 中國水仙繁殖方式
    2 花色形成機理
        2.1 類胡蘿卜素與花色形成的關系
        2.2 類黃酮與花色形成的關系
    3 類黃酮提取與鑒定方法
    4 本試驗的研究目的及意義
第二章 HPLC-MS~n技術鑒定中國水仙花類黃酮成分
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 試驗材料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 試驗儀器
        1.2 方法
            1.2.1 中國水仙類黃酮成分提取方法的比較
            1.2.2 HPLC-MS~n檢測條件的建立
    2 結果與分析
        2.1 中國水仙類黃酮成分提取方法的比較
        2.2 中國水仙類黃酮HPLC-MS~n鑒定方法的比較
    3 討論
        3.1 不同提取方法中中國水仙花瓣類黃酮成分的差異
        3.2 HPLC-MS~n結合ESI和DAD技術在定性苷類物質有獨特的優(yōu)勢
        3.3 1%乙酸-乙腈是適合中國水仙花瓣類黃酮成分提取的HPLC-MS~n流動相體系
第三章 不同時期中國水仙花類黃酮、酚酸物質含量的變化
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 試驗材料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 試驗儀器
        1.2 方法
    2 結果與分析
        2.1 線性回歸方程及相關參數
        2.2 不同時期中國水仙花類黃酮、酚酸物質HPLC-MS~n總離子圖及物質鑒定
        2.3 不同時期中國水仙花類黃酮、酚酸物質含量變化
    3 討論
        3.1 中國水仙花發(fā)育過程中黃酮醇物質的合成與積累
        3.2 蘆丁可能通過甲基化形成結構更穩(wěn)定的水仙苷
第四章 中國水仙花發(fā)育過程的表達譜分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 試驗材料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 試驗儀器
        1.2 方法
            1.2.1 RNA提取與檢測
            1.2.2 中國水仙花發(fā)育過程的表達譜測序
    2 結果與分析
        2.1 總RNA質量檢測
        2.2 測序數據統(tǒng)計與評估
            2.2.1 測序質量值分布檢查
            2.2.2 測序產出統(tǒng)計
        2.3 RNA-Seq整體質量評估
            2.3.1 與參考基因組比對統(tǒng)計
            2.3.2 cDNA片段隨機性檢驗
            2.2.3 測序飽和度檢驗
        2.4 中國水仙花色發(fā)育類黃酮合成途徑差異表達基因篩選
            2.4.1 佛焰總苞中期與其它時期各組織類黃酮生物合成途徑差異基因的篩選
                2.4.1.2 相同時期不同組織類黃酮生物合成途徑差異基因的篩選
                2.4.1.3 不同時期相同組織類黃酮生物合成途徑差異基因的篩選
            2.4.2 中國水仙花色發(fā)育黃酮與黃酮醇生物合成途徑中差異表達基因篩選
                2.4.2.1 佛焰總苞中期與其它時期各組織黃酮與黃酮醇生物合成途徑差異基因的篩選
                2.4.1.2 相同時期不同組織黃酮與黃酮醇生物合成途徑差異基因的篩選
    3 討論
第五章 中國水仙類黃酮合成途徑相關基因的表達研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 試驗材料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 試驗儀器
        1.2 方法
            1.2.1 RNA提取與檢測
            1.2.2 cDNA合成
            1.2.3 qPCR引物設計
            1.2.4 兩步法qPCR
            1.2.5 數據分析及作圖
    2 結果與分析
        2.1 類黃酮合成途徑中差異基因在中國水仙花花瓣發(fā)育不同時期的表達情況
        2.2 類黃酮合成途徑中差異基因在中國水仙花副冠不同發(fā)育時期的表達情況
        2.3 類黃酮合成途徑中差異基因在中國水仙花佛焰總苞中期雄蕊、花瓣的表達情況
        2.4 類黃酮合成途徑中差異基因在中國水仙花綠苞期花瓣、副冠的表達情況
        2.5 類黃酮合成途徑中差異基因在中國水仙花盛花期花瓣、副冠的表達情況
    3 討論
第六章 總結與展望
    1 結論
    2 展望
附錄1
附錄2
附錄3 不同發(fā)育進程的中國水仙花
致謝
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[2]葡萄風信子（Muscari）花色形成與相關基因研究[D]. 婁倩.西北農林科技大學 2014
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[6]金柑等柑橘類果實黃酮類化合物提取、純化及分離鑒定[D]. 陳源.福建農林大學 2011

碩士論文
[1]‘平潭水仙’β-葡萄糖苷酶與揮發(fā)性芳香物質形成關系的研究[D]. 鐘嫻.福建農林大學 2014
[2]漳州水仙鱗莖盤轉錄組分析及類黃酮合成途徑基因的表達[D]. 羅鵬.福建農林大學 2014
[3]不同花生品種類黃酮積累及其合成酶活性對干旱脅迫的響應[D]. 孫利.山東農業(yè)大學 2013
[4]無花果葉類黃酮提取、純化、鑒定及抗氧化研究[D]. 吳子江.福建農林大學 2013
[5]水仙類胡蘿卜素合成途徑基因的表達及花色相關基因克隆[D]. 鄭益平.福建農林大學 2013
[6]花瓣花色苷分離純化技術及雜交后代花色苷遺傳分析研究[D]. 陳越.寧波大學 2012
[7]觀賞海棠花青素代謝途徑與產物的研究[D]. 耿健.西南大學 2011
[8]洋蔥類黃酮的提取及生物活性研究[D]. 郭詹菁.福建農林大學 2010
[9]中國水仙遺傳轉化及花色素成分分析[D]. 張慧平.福建農林大學 2010
[10]液—質聯(lián)用法檢測乳品中六種聚醚類抗生素的殘留[D]. 雒麗麗.甘肅農業(yè)大學 2009



本文編號：3655573