發(fā)布時(shí)間：2022-04-17 20:08

　　草莓鑲脈病毒（Strawberry vein banding virus,SVBV）中國(guó)分離物侵染性克隆pSVBV-SY可以侵染森林草莓,但是葉片劃傷接種侵染率較低,阻礙了侵染性克隆的研究。為了改進(jìn)接種方法,本研究利用農(nóng)桿菌真空抽濾法接種草莓,可顯著提高接種效率,pSVBV-SY在森林草莓上實(shí)現(xiàn)高效侵染且表現(xiàn)出典型鑲脈癥狀。SVBV病毒載體pSVBV-MCS同法接種森林草莓,可驗(yàn)證其侵染性。已有研究發(fā)現(xiàn)花椰菜花葉病毒科病毒P6蛋白能夠反式激活多順?lè)醋觤RNA的翻譯,本研究鑒定SVBV P6蛋白是病毒的翻譯反式激活因子（transactivator）,能夠高效激活人工構(gòu)建雙順?lè)醋拥?個(gè)基因的表達(dá)。預(yù)測(cè)反式激活因子P6功能域,構(gòu)建系列P6突變體,發(fā)現(xiàn)P6各突變體均不能反式激活雙順?lè)醋拥?個(gè)基因的表達(dá)。1 SVBV侵染性克隆的侵染性鑒定和檢測(cè)比較劃傷接種法和真空抽濾法接種草莓的接種效率,SVBV沈陽(yáng)分離物侵染性克隆pSVBV-SY接種森林草莓,均接種15株,35d后檢測(cè)侵染率,劃傷接種侵染率僅在20%-40%之間,真空抽濾法接種侵染率在86%-100%之間。顯癥植株P(guān)CR均能夠檢測(cè)到pSVB... 

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    1 草莓鑲脈病毒
        1.1 草莓鑲脈病毒的分類及其主要特性
        1.2 草莓鑲脈病毒基因組結(jié)構(gòu)及其編碼的蛋白及功能
    2 植物病毒侵染性克隆與病毒載體
        2.1 植物病毒侵染性克隆
        2.2 植物病毒載體
        2.3 植物病毒侵染性克隆接種方法
    3 真核細(xì)胞基因翻譯再起始
        3.1 真核細(xì)胞基因翻譯再起始概述
        3.2 CaMV病毒反式激活因子的研究進(jìn)展
            3.2.1 反式激活因子簡(jiǎn)介
            3.2.2 CaMV反式激活因子TAV,調(diào)控多順?lè)醋觤RNA的翻譯
            3.2.3 TAV與寄主體內(nèi)翻譯因子的互作研究
引言
材料與方法
    1 材料
        1.1 植物材料
        1.2 菌株、質(zhì)粒和載體
        1.3 酶和常用試劑
        1.4 常用緩沖溶液
        1.5 常用實(shí)驗(yàn)儀器
    2 方法
        2.1 草莓葉片總DNA的提取
            2.1.1 CTAB抽提液配制
            2.1.2 CTAB法提取草莓葉片總DNA操作步驟
        2.2 總RNA的提取
        2.3 PCR技術(shù)
            2.3.1 Taq酶反應(yīng)體系配制
            2.3.2 Taq酶反應(yīng)程序設(shè)置
        2.4 基因的克隆步驟
            2.4.1 高保真酶PCR擴(kuò)增
            2.4.2 高保真酶PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序設(shè)置
            2.4.3 PCR產(chǎn)物生成粘性末端
            2.4.4 DNA產(chǎn)物的連接
            2.4.5 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.4.6 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.4.7 質(zhì)粒提取
        2.5 農(nóng)桿菌接種
            2.5.1 農(nóng)桿菌浸潤(rùn)本氏煙
            2.5.2 SVBV侵染性克隆接種森林草莓
        2.6 雙順?lè)醋拥目寺?gòu)建
            2.6.1 引物設(shè)計(jì)
            2.6.2 雙順?lè)醋拥目寺?br>        2.7 植物蛋白提取
結(jié)果與分析
    1 SVBV侵染性克隆的侵染性鑒定和檢測(cè)
        1.1 SVBV侵染性克隆真空抽濾法接種草莓
        1.2 SVBV沈陽(yáng)分離物侵染性克隆具有侵染性
        1.3 SVBV沈陽(yáng)分離物侵染性克隆接種森林草莓的檢測(cè)
    2 SVBV病毒載體的侵染性鑒定
        2.1 SVBV病毒載體具有侵染性
    3 SVBV病毒侵染性克隆能夠反式激活雙順?lè)醋颖磉_(dá)
        3.1 SVBV病毒侵染性克隆能夠反式激活CaMV雙順?lè)醋颖磉_(dá)
    4 SVBV病毒反式激活因子的鑒定
        4.1 除P6外病毒其他各ORF蛋白均不能反式激活雙順?lè)醋颖磉_(dá)
        4.2 P6蛋白能夠反式激活不同病毒來(lái)源雙順?lè)醋颖磉_(dá)
    5 P6蛋白反式激活功能域的探究
        5.1 P6蛋白各個(gè)突變體均不能反式激活雙順?lè)醋颖磉_(dá)
討論
    1 SVBV病毒侵染性克隆的接種方法
    2 SVBV病毒載體的構(gòu)建
    3 P6反式激活功能域的研究
    4 P6對(duì)反式激活翻譯過(guò)程的調(diào)控機(jī)制
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ICTV第九次報(bào)告以來(lái)的植物病毒分類系統(tǒng)[J]. 洪健,周雪平.  植物病理學(xué)報(bào). 2014(06)
[2]草莓鑲脈病毒研究進(jìn)展[J]. 肖敏,張志宏.  遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué). 2005(04)
[3]草莓病毒病研究進(jìn)展[J]. 周厚成,何水濤.  果樹(shù)學(xué)報(bào). 2003(05)
[4]正鏈RNA病毒基因組感染性克隆研究進(jìn)展[J]. 吳海祥,張楚瑜.  武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版). 2002(04)
[5]乙型肝炎病毒蛋白反式激活基因的研究[J]. 劉妍,成軍,陸蔭英,李克.  世界華人消化雜志. 2002(02)
[6]草莓病毒種類鑒定及培育無(wú)病毒種苗的技術(shù)研究[J]. 王國(guó)平,劉福昌,薛光榮,朱秋英,楊振英,王煥玉.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 1990(04)

碩士論文
[1]草莓鑲脈病毒抑制沉默機(jī)制及其中國(guó)分離物侵染性鑒定[D]. 張漢平.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3646186