梨是我國種植分布最廣的水果之一,其年產(chǎn)量僅次于柑橘和蘋果,梨產(chǎn)業(yè)的發(fā)展對地區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的促進(jìn)起著重要的作用。隨著人們水活水平的提高,人們對水果的需求不斷擴(kuò)大,梨產(chǎn)業(yè)也迎來了巨大的發(fā)展。在生產(chǎn)當(dāng)中,鹽脅迫是一種最常見的環(huán)境因素,對植物的生長發(fā)育、地理分布、產(chǎn)量有著非常嚴(yán)重的影響。因此,在長期以來如何提高植物耐鹽性一直是一個十分重要的研究方向,也是人們最廣泛研究的課題之一。雖然采取一些人工的栽培方法可以提高植物的耐鹽性,但最有效的解決辦法還是培育出耐鹽新品種。作為傳統(tǒng)育種的補(bǔ)充,當(dāng)前基因工程已經(jīng)被證明是一種高效可行的新方法,然而基因工程育種的前提是找到具有耐鹽功能的基因。從已有的研究得知,植物NHX1基因在植物的耐鹽脅迫當(dāng)中扮演著重要的角色,所以本研究從杜梨（Pyrus betuLaefolia）中分離克隆得到PbNHX1基因,并對它的抗逆功能進(jìn)行鑒定。主要目的是為了深入了解PbNHX1基因的抗性機(jī)理,從而獲得具有自主知識產(chǎn)權(quán)的梨抗性基因資源。主要研究結(jié)果如下:在本研究中,我們采用電子克隆技術(shù)從杜梨當(dāng)中得到了PbNHX1基因。PbNHX1基因具有完整的1635 bp的開放閱讀框,編碼544個... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１鹽脅迫植物的傷害和耐鹽性的生理機(jī)制（Ｚｈｕ．?２００１）??Ｆｉｇ?１－１?ｔｈｅ?ｈａｒｍｌｅｓｓ?ｏｆ?ｓａｌｔ?ｓｔｒｅｓｓ?ａｎｄ?ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ｓａｌｔ?ｔｏｌｅｒａｎｃｅ?ｏｆ?ｐｌａｎｔ（Ｚｈｕ，?２００１）??

４．１?Ｐ６Ｗ／／Ｘ／轉(zhuǎn)基因煙草的陽性苗檢測??提取經(jīng)過潮霉素篩選表型正常的的轉(zhuǎn)基因Ｔ〇代苗和野生型（ＷＴ）植株的基因組??ＤＮＡ，提取方法同２．８．１。結(jié)果如圖３－５所示，所提取的基因組ＤＮＡ結(jié)構(gòu)完整，沒有蛋??白污染，純度較高，適用于ＰＣＲ檢測。以基因組ＤＮＡ為模板，基因特異引物ＲＴ－ＰＣＲ??擴(kuò)增目的條帶，目的條帶如圖３－６，條帶單一。從１００株轉(zhuǎn)基因Ｔ（，代幼苗中，鑒定出２５??株陽性苗，但是在野生型當(dāng)中未檢測出。??３０??

?－１６３５ｂｐ??ｉＳＢｆｉｌ??圖３－６部分轉(zhuǎn)基因植株基因ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇ．?３－６?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｐａｒｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＰｂＮＨＸｌ?ｇｅｎｅ?ｕｓｉｎｇ?ＰＣＲ??Ｍ：ＤＬ２０００分子量標(biāo)準(zhǔn)；１，２，?４轉(zhuǎn)基因陽性植株；３，?５轉(zhuǎn)基因陰性植株；６質(zhì)粒陽性對照；７，??８非轉(zhuǎn)基因植株??Ｍ：?ＤＬ２０００?ｍａｒｋｅｒ；?１，?２，?４?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ；?３，?５?ｎｏ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ；?６?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?７，?８??ｕｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ??４．２?轉(zhuǎn)基因煙草的陽性苗超表達(dá)系鑒定??提取移栽成活的２５株轉(zhuǎn)基因陽性苗的ＲＮＡ，通過跑膠檢測其結(jié)構(gòu)完整，如圖３－??７，利用ｎａｎｏｄｒｏｐ測定其濃度后（濃度均在２００－６００?ｎｇ／ｕｌ），將ＲＮＡ總量調(diào)整為３?ｕｇ后進(jìn)??行反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ，再用煙草的ｕｂｉｑｕｔｉｎ作為內(nèi)參進(jìn)行擴(kuò)增。用ｕｂｉｑｕｔｉｎ擴(kuò)增出來的條??３１??


本文編號：3551698