梨是我國主要的果樹之一,廣泛分布于全國各地,梨產(chǎn)業(yè)的發(fā)展對促進(jìn)地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展有重要作用。近年來梨產(chǎn)業(yè)雖然取得了巨大的進(jìn)展,但常受到低溫,干旱和鹽堿等非生物脅迫的影響,因此如何高效提高梨樹的抗逆性成為當(dāng)前迫切需要解決的課題。近年來隨著基因工程的發(fā)展,為梨的抗逆育種提供了 一條新途徑。本研究分別以‘杜梨’和‘山梨’為實驗材料,克隆了PbeNAC1和PbeMYB2,PubHLH1和PuALDH2基因,并對它們進(jìn)行抗逆功能驗證。主要結(jié)果如下:1.從杜梨中克隆得到PbeNAC1,該基因的開放閱讀框全長為927bp,編碼了 308個氨基酸,預(yù)測的蛋白分子量為35.6KDa,等電點為6.46。進(jìn)化分析顯示PbeNAC1與擬南芥和水稻ATAF家族成員具有較高的同源性。多序列比對顯示PbeNAC1同其它物種的NAC氨基酸序列相似,都具有非常保守的N端和一個核定位信號。PbeNAC1是一個核蛋白,并具有轉(zhuǎn)錄激活活性。PbeNAC1能夠被低溫,脫水和鹽脅迫誘導(dǎo)。與對照相比,超表達(dá)PbeNAC1的轉(zhuǎn)基因煙草具有較強的抗寒和抗旱能力。在低溫或干旱脅迫下,與對照相比轉(zhuǎn)基因株系中活性氧的水平更低,三種抗氧化酶的活也更...

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 非生物脅迫及其對植物的傷害
        1.1 非生物脅迫
        1.2 非生物脅迫對植物造成的傷害
    2 植物對非生物脅迫的響應(yīng)
        2.1 植物體內(nèi)清除活性氧系統(tǒng)對非生物脅迫的響應(yīng)
        2.2 植物體內(nèi)一些滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)對非生物脅迫的響應(yīng)
        2.3 植物響應(yīng)非生物脅迫的信號途徑
    3 結(jié)語
第二章 杜梨PbeNAC1基因的克隆及功能分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 脅迫處理
        1.3 PbeNAC1基因的克隆與生物信息學(xué)分析
        1.4 PbeNAC1基因表達(dá)分析
        1.5 PbeNAC1的亞細(xì)胞定位
        1.6 PbeNAC1的轉(zhuǎn)錄激活活性分析
        1.7 植物超表達(dá)載體構(gòu)建和煙草的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.8 轉(zhuǎn)基因煙草的陽性鑒定
        1.9 PbeNAC1超表達(dá)株系苗期的抗逆功能分析
        1.10 PbeNAC1超表達(dá)株系幼苗的抗氧化脅迫功能分析
        1.11 酵母雙雜交與雙分子熒光互補分析
        1.12 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 PbeNAC1基因的序列分析
        2.2 PbeNAC1基因?qū)Ω鞣N非生物脅迫的響應(yīng)模式
        2.3 PbeNAC1是一個核蛋白
        2.4 PbeNAC1具有轉(zhuǎn)錄激活活性
        2.5 PbeNAC1轉(zhuǎn)基因煙草陽性株系的鑒定
        2.6 PbeNAC1超表達(dá)株系的抗寒和抗旱的功能鑒定
        2.7 PbeNAC1超表達(dá)株系能調(diào)控ROS平衡
        2.8 PbeNAC1與PbeDREBs存在蛋白相互作用關(guān)系
        2.9 超表達(dá)PbeNAC1對抗氧化和抗逆相關(guān)基因表達(dá)量的影響
    3 討論
第三章 杜梨PbeMYB2基因的克隆與功能分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 脅迫處理
        1.3 PbeMYB2基因的克隆與生物信息學(xué)分析
        1.4 PbeMYB2基因表達(dá)分析
        1.5 PbeMYB2的亞細(xì)胞定位
        1.6 PbeMYB2的轉(zhuǎn)錄激活活性分析
        1.7 植物超表達(dá)載體構(gòu)建和煙草的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.8 轉(zhuǎn)基因煙草的陽性鑒定
        1.9 PbeMYB2超表達(dá)株系的抗鹽功能分析
        1.10 PbeMYB2超表達(dá)株系抗氧化脅迫分析
        1.11 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 PbeMYB2基因的序列分析
        2.2 PbeMYB2對非生物脅迫的響應(yīng)模式
        2.3 PbeMYB2是一個核蛋白
        2.4 PbeMYB2具有轉(zhuǎn)錄激活活性
        2.5 PbeMYB2轉(zhuǎn)基因煙草的陽性鑒定
        2.6 PbeMYB2超表達(dá)株系的抗鹽功能驗證
        2.7 PbeMYB2超表達(dá)株系的抗氧化脅迫分析
        2.8 超表達(dá)PbeMYB2對抗氧化和抗逆相關(guān)基因表達(dá)量的影響
    3 討論
第四章 山梨PubHLH1基因的克隆及功能分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 脅迫處理
        1.3 PubHLH1的基因克隆及生物信息學(xué)分析
        1.4 PubHLH1基因表達(dá)分析
        1.5 PubHLH1的亞細(xì)胞定位
        1.6 PubHLH1的轉(zhuǎn)錄激活活性分析
        1.7 植物超表達(dá)載體構(gòu)建和煙草的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.8 轉(zhuǎn)基因煙草的陽性鑒定
        1.9 PubHLH1超表達(dá)株系苗期的抗寒性分析
        1.10 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 PubHLH1基因的序列分析
        2.2 PubHLH1基因在各種逆境處理后的基因表達(dá)分析
        2.3 PubHLH1亞細(xì)胞定位分析
        2.4 PubHLH1具有轉(zhuǎn)錄激活活性
        2.5 PubHLH1轉(zhuǎn)基因煙草株系的陽性鑒定
        2.6 PubHLH1提高了轉(zhuǎn)基因煙草的抗寒性
        2.7 組織化學(xué)染色分析轉(zhuǎn)基因煙草與對照的細(xì)胞死亡和ROS水平
        2.8 低溫處理前后對照和轉(zhuǎn)基因株系抗氧化酶活性檢測
        2.9 低溫處理前后對照和轉(zhuǎn)基因株系抗逆相關(guān)基因的表達(dá)分析
    3 討論
第五章 山梨PuALDH2基因的克隆與功能分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 脅迫處理
        1.3 PuALDH2的克隆與生物信息學(xué)分析
        1.4 PuALDH2基因表達(dá)分析
        1.5 植物超表達(dá)載體的構(gòu)建與煙草的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.6 轉(zhuǎn)基因煙草的陽性鑒定
        1.7 PuALDH2超表達(dá)株系苗期的抗寒功能分析
        1.8 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 PuALDH2基因的序列分析
        2.2 PuALDH2基因?qū)Ω鞣N非生物脅迫的響應(yīng)模式
        2.3 PuALDH2轉(zhuǎn)基因煙草陽性株系的鑒定
        2.4 PuALDH2超表達(dá)株系的抗寒功能鑒定
        2.5 低溫處理前后對照與轉(zhuǎn)基因株系抗氧化酶活性測定
        2.6 低溫處理前后對照和轉(zhuǎn)基因株系抗逆相關(guān)基因的表達(dá)分析
    3 討論
全文結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
已發(fā)表和待發(fā)表文章
附錄
致謝



本文編號：3997538