真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白家族（FIPs）,是從大型真菌中發(fā)現(xiàn)的一類小分子量蛋白質(zhì),其結(jié)構(gòu)與天然免疫球蛋白相似,具有與植物凝集素相似的生物學(xué)活性。目前已有十余種真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白相繼被發(fā)現(xiàn)。雖然存在于不同的物種當(dāng)中,但其結(jié)構(gòu)具有高度同源性,在體外均具有抗腫瘤、抗過敏、凝集血細(xì)胞等生物學(xué)免疫活性。本論文由兩部分組成。第一部分為農(nóng)桿菌介導(dǎo)金針菇FIP-fve基因沉默的遺傳轉(zhuǎn)化,包括構(gòu)建金針菇免疫調(diào)節(jié)蛋白FIP-fve的RNAi載體,轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404并以農(nóng)桿菌為介導(dǎo)轉(zhuǎn)化金針菇菌絲體,建立金針菇遺傳轉(zhuǎn)化體系。為了考證FIP-fve對金針菇自身的生物學(xué)功能,我們以金針菇免疫調(diào)節(jié)蛋白FIP-fve為研究對象,克隆FIP-fve基因正反片段并構(gòu)建其RNAi載體。用農(nóng)桿菌LBA4404菌株介導(dǎo)轉(zhuǎn)化至金針菇菌絲體內(nèi)。優(yōu)化轉(zhuǎn)化篩選條件,利用潮霉素抗性篩選轉(zhuǎn)化的金針菇菌絲體,獲得FIP-fve基因沉默表達(dá)的陽性轉(zhuǎn)化子。對比野生型金針菇進(jìn)行菌絲體培養(yǎng)和表型觀察,初步推測出FIP-fve對金針菇本身的生物學(xué)功能。雙酶切檢測結(jié)果證明己成功構(gòu)建RNAi載體pTCK303-fve（F）-fve（R）。用液氮轉(zhuǎn)化法獲得重組... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 真菌概述
    1.2 真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白FIPs研究進(jìn)展
        1.2.1 真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 FIPs的生物學(xué)功能
    1.3 蛋白重組表達(dá)
        1.3.1 原核表達(dá)系統(tǒng)
        1.3.2 昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
        1.3.3 酵母表達(dá)系統(tǒng)
        1.3.4 其他重組表達(dá)系統(tǒng)
        1.3.5 FIPs重組表達(dá)研究進(jìn)展
    1.4 大型真菌遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建
        1.4.1 遺傳轉(zhuǎn)化方法
        1.4.2 金針菇遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
    1.5 本論文的研究意義
第二章 農(nóng)桿菌介導(dǎo)金針菇FIP-fve基因沉默的遺傳轉(zhuǎn)化
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 菌種與質(zhì)粒
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 金針菇子實(shí)體中FIP-fve的前期檢測
        2.2.2 金針菇FIP-fve基因正反片段的克隆
        2.2.3 金針菇FIP-fve的RNAi載體構(gòu)建
        2.2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)金針菇遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 金針菇子實(shí)體FIP-fve的前期檢測
        2.3.2 金針菇免疫調(diào)節(jié)蛋白基因正反片段的克隆
        2.3.3 金針菇免疫調(diào)節(jié)蛋白基因RNAi載體構(gòu)建
        2.3.4 農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)轉(zhuǎn)化金針菇的遺傳轉(zhuǎn)化體系
    2.4 討論與結(jié)論
第三章 血紅鉚釘菇FIP基因克隆及重組表達(dá)
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種與質(zhì)粒
        3.1.2 酶及試劑
        3.1.3 試驗(yàn)儀器
        3.1.4 培養(yǎng)基
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 血紅鉚釘菇FIP-cru的克隆及生物信息學(xué)分析
        3.2.2 重組表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.3 重組酵母轉(zhuǎn)化子的獲得與篩選
        3.2.4 rFIP-cru的表達(dá)與檢測
        3.2.5 rFIP-cru生物活性檢測
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 血紅鉚釘菇FIP-cru克隆及生物信息學(xué)分析
        3.3.2 重組表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.3 重組酵母轉(zhuǎn)化子獲得與鑒定
        3.3.4 rFIP-cru蛋白的表達(dá)、純化與檢測
        3.3.5 rFIP-cru蛋白生物活性檢測
    3.4 討論與結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄：英文縮略詞
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]銀耳遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的建立及三個(gè)品質(zhì)基因的轉(zhuǎn)化[D]. 謝寶貴.福建農(nóng)林大學(xué) 2004

碩士論文
[1]兩種真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因的克隆以及在畢赤酵母GS115中的重組表達(dá)[D]. 賈佳.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]杏鮑菇遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立與pyrG基因的克隆[D]. 尹永剛.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的香菇遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建[D]. 喻晶晶.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]平菇遺傳轉(zhuǎn)化體系和轉(zhuǎn)漆酶工程菌株的構(gòu)建[D]. 董曉雅.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[5]農(nóng)桿菌介導(dǎo)人胰島素基因BCA轉(zhuǎn)化銀耳研究[D]. 郭益童.福建農(nóng)林大學(xué) 2010



本文編號：3511253