金針菇[Flammulina velutipes (Fr.) Sing]是我國最先進行工廠化栽培的蕈菌,從始至今不乏對其栽培技術(shù)和栽培模式的研究,對其栽培過程中的生理機制以及深入的研究還有待進一步的探索。菌絲達到生理菌齡后,經(jīng)過定期的低溫刺激,才能進行子實體的分化和生長,對其低溫刺激的分子機制研究還處于初級階段,導(dǎo)致深層次的研究和生產(chǎn)技術(shù)革新基礎(chǔ)理論滯后。鑒于金針菇不同生長發(fā)育階段的生物學(xué)特性及栽培過程中對低溫的敏感性,金針菇是可應(yīng)用于大型食用真菌低溫脅迫下分子水平研究的理想材料。本研究將固體PDA加富培養(yǎng)基置于90mm培養(yǎng)皿中,經(jīng)過短期和長期低溫刺激菌絲后收集菌絲樣品,運用iTRAQ結(jié)合二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),對金針菇對照菌絲、短期低溫刺激菌絲和長期低溫刺激菌絲的蛋白質(zhì)樣品進行分離、鑒定及定量分析;最后采用RT-PCR對全部差異蛋白質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄水平進行了分析,對基于iTRAQ結(jié)合2DLC-MS/MS鑒定出的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)的準確性進行了驗證。主要研究結(jié)果如下：1.通過出菇實驗、細胞質(zhì)純化和細胞核純化得到了可用于實驗的優(yōu)良菌株。2.采用甲醇-醋酸銨法對菌絲樣品進行蛋白質(zhì)提取和SDS-PAG...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１金針猜單核菌株和核配菌株制備??

的四株極性不同的初生菌絲兩兩雜交，鏡檢鎖狀聯(lián)合，對初步獲得的四級性初生菌株進??行驗證。獲得具有來源于親本不同極性的兩個細胞核，得到純化了細胞核的優(yōu)良菌株。??具體試驗流程如下圖２－１所示。??－１０－??

圖３－１不同菌絲蛋白樣品的電泳圖??注：Ｍ為ＰｒｏｔｅｉｎＭａｒｋｅｒ?（１４－１００?ｋＤａ）；泳道１為樣品１，泳道２為樣品２，泳道３為樣品３??

３．１電泳檢測結(jié)果??電泳檢測采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ進行圖示化，總蛋白提化結(jié)果經(jīng)成像系統(tǒng)成像后結(jié)果如??圖３－１。結(jié)果表明Ｈ個樣品的蛋白質(zhì)條帶較完整，條帶清晰且分離效果較好，初步判定??蛋白質(zhì)樣品存在差異。??Ｍ?Ｉ?：?３??－：．ｋＤａ＿??＇＇酒Ｅ??５ＤｋＤａ＊＿?ｊｆｅＳ....

圖３－３金針窺３個菌絲樣品蛋白質(zhì)組的表達量分布范圍分祈??．－

Ｎｏｔｅ：?Ａ?ｉｎｄｉｃａｌｉｅｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌ；?Ｂｉｎｄｉｃａ化ｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ；?Ｃ?ｉｎｄｉｃａ１：ｅｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ??３．３．３鑒定蛋白質(zhì)的表達量特異性分析??表達量箱型圖顯示（圖３－４）?：３個樣品間的基線變化較大，處于核也區(qū)域的蛋白....

圖３－５金針茹不同菌竺樣品蛋白廢組的的分層聚類圖??；，

Ｆｉｇ．３－５?Ｈｉｅｒａｒｃｈｙ?ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｏｍｅｓ?ｉｎ?Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ?ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ??Ｎｏｔｅ：?Ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｄｏｗｎ－巧邑ｕｌａｔｅｄ?ｗｅｒｅ?ｍａｒｋｅｄ?ｉｎ?ｒｅｄ?ａｎｄ?....

本文編號：3999594