棗樹（Zizyphus jujube Mill.）是中國(guó)第一大干果樹種,在干果產(chǎn)業(yè)中具有十分重要的地位。由細(xì)交鏈孢菌（Alternaria alternata（Fr.）Keissler）等引起的棗縮果病是危害棗樹最嚴(yán)重的病害之一。病原菌侵染規(guī)律的復(fù)雜性和病原菌的多樣性造成了防治上的困難。常規(guī)的藥劑防治不僅污染環(huán)境,而且無(wú)法從根本上解決問(wèn)題。人工雜交育種又存在授粉困難與敗育現(xiàn)象。因此篩選抗性基因進(jìn)行轉(zhuǎn)基因育種才可能建立有效的防治棗縮果病的方法。本研究運(yùn)用抑制消減雜交技術(shù)（SSH）構(gòu)建了c DNA文庫(kù),了解棗果與細(xì)交鏈孢菌互作后的基因表達(dá)情況,分析了與防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)的基因特性,從分子水平來(lái)研究棗抗縮果病的機(jī)制,為育種奠定理論基礎(chǔ)。本試驗(yàn)主要結(jié)果如下:1.本研究以抗病品種蜂蜜罐白熟期時(shí)的棗果作為試驗(yàn)材料,經(jīng)細(xì)交鏈孢菌侵染后分別于12 h、24 h、48 h、72 h、96 h采集棗果,將5次采樣提取的RNA混合后反轉(zhuǎn)錄為c DNA作為為試驗(yàn)方,同理,以不接菌的對(duì)照棗果為驅(qū)動(dòng)方,構(gòu)建SSH-c DNA文庫(kù),保存了1000個(gè)陽(yáng)性克隆,隨機(jī)挑選200個(gè)進(jìn)行測(cè)序,共有182條序列測(cè)通,將這些表達(dá)序列標(biāo)... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 棗樹的栽培現(xiàn)狀與價(jià)值
    1.2 棗縮果病的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 棗縮果病的分布及造成的危害
        1.2.2 棗縮果病發(fā)生規(guī)律
        1.2.3 棗縮果病原菌的研究
    1.3 植物的抗病機(jī)制
        1.3.1 植物的抗病性
        1.3.2 寄主-病原物互作
        1.3.3 抗病信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
    1.4. 抑制消減雜交技術(shù)（SSH）
        1.4.1 抑制消減雜交技術(shù)原理及技術(shù)流程
        1.4.2 抑制消減雜交技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)
        1.4.3 抑制性消減雜交技術(shù)在抗病基因研究中的應(yīng)用
    1.5 表達(dá)序列標(biāo)簽（EST）
        1.5.1 EST的應(yīng)用
        1.5.2 研究的局限性
        1.5.3 序列同源產(chǎn)物的功能分類
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 主要儀器、試劑（盒）及耗材的處理
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料的制備
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 c DNA合成
        2.2.4 差異片段的富集
        2.2.5 SSH文庫(kù)的構(gòu)建
        2.2.6 陽(yáng)性克隆測(cè)序及序列生物信息學(xué)分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 棗果總RNA的提取
    3.2 雙鏈合成的最優(yōu)循環(huán)數(shù)確定及c DNA的純化
    3.3 RsaⅠ酶切
    3.4 接頭連接效率分析
    3.5 差減效率的檢測(cè)
    3.6 差減雜交后兩輪PCR產(chǎn)物擴(kuò)増結(jié)果分析
    3.7 陽(yáng)性克隆的篩選
    3.8 文庫(kù)質(zhì)量的檢測(cè)
    3.9 ESTs序列分析及功能分類
        3.9.1 ESTs序列分析
        3.9.2 功能分類
第四章 討論與分析
    4.1 關(guān)于RNA的提取
    4.2 EST的功能分類
        4.2.1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的基因
        4.2.2 轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)的基因
        4.2.3 抗病相關(guān)的基因
    4.3 下一步研究計(jì)劃
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]植原體脅迫下棗SSH文庫(kù)的構(gòu)建及表達(dá)序列標(biāo)簽分析[D]. 王洋.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3457647