核桃（Juglans regia）屬胡桃科胡桃屬植物,是世界著名的‘四大干果’之一,富含有益于身體健康的不飽和脂肪酸,目前在我國分布廣泛,是重要的經濟果樹林木。目前對核桃的研究主要集中在核桃品質、品種選育、豐產栽培及加工利用等方面,很少從分子水平探討核桃的生理調控機制。近年來,全球溫度的變化導致我國西北地區(qū)“倒春寒”現(xiàn)象頻發(fā),對核桃生產和經濟效益造成了嚴重的影響。小分子熱激蛋白（sHSPs）是重要的抗逆響應蛋白,但在木本植物中研究較少,特別是在核桃中的研究鮮有報道。本研究從‘香玲’核桃轉錄組中篩選獲得若干sHSP基因。通過實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術分析其在不同溫度脅迫下的表達模式。通過構建酵母表達載體轉入酵母中分析其在低溫、高溫及鹽脅迫下對酵母生長的影響;構建植物過表達載體瞬時表達核桃,分析不同溫度脅迫下的相關生理指標來探討核桃sHSP蛋白的逆境響應功能。本研究的主要結果如下:（1）通過分析核桃葉片組織轉錄組數(shù)據(jù),得到15條sHSP基因序列,通過BLAST、進化分析及多序比對分析,對這些蛋白的序列特征進行了初步分析。通過定量表達分析發(fā)現(xiàn)其中JrsHSP17.3和JrsHS... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 引言
    1.2 低溫對植物的影響
    1.3 熱激蛋白的研究概述
        1.3.1 熱激蛋白簡介
        1.3.2 熱激蛋白的功能
        1.3.3 小分子熱激蛋白（sHSPs）的結構
        1.3.4 小分子熱激蛋白（sHSP）的分類
        1.3.5 小分子熱激蛋白（sHSP）簡介與功能
    1.4 本研究的目的、意義
    1.5 本研究的內容及技術路線
第二章 核桃sHSP家族基因篩選及確認
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種與載體
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 溶液配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 核桃sHSP家族基因的篩選
        2.2.2 JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 基因的克隆
        2.2.3 實時定量PCR
    2.3 結果與分析
        2.3.1 sHSP家族基因的序列特征
        2.3.2 核桃sHSP家族基因的跨膜區(qū)預測
        2.3.3 核桃sHSP家族蛋白序列分析
        2.3.4 核桃sHSP家族基因的進化分析
        2.3.5 核桃sHSP家族基因蛋白結構預測
        2.3.6 核桃sHSP家族基因的表達特征
        2.3.7 JrsHSP17.3 基因和JrsHSP20-1 基因的定量表達分析
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第三章 轉JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 的酵母抗逆性分析
    3.1 試驗材料
        3.1.1 菌株和載體
        3.1.2 主要試劑
    3.2 試驗方法
        3.2.1 酵母表達載體的構建
        3.2.2 重組質粒和pYES2質粒的酵母轉化及鑒定
        3.2.3 重組酵母的脅迫實驗
    3.3 結果與分析
        3.3.1 表達載體及酵母重組子的獲得
        3.3.2 重組酵母的抗性分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結
第四章 JrsHSP17.3 基因在核桃中的瞬時表達分析
    4.1 試驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌種與載體
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 培養(yǎng)基和溶液的配制
    4.2 試驗方法
        4.2.1 核桃JrsHSP17.3 基因的過表達載體的構建
        4.2.2 瞬時侵染核桃葉
        4.2.3 瞬時轉化核桃JrsHSP17.3 基因的表達分析
        4.2.4 瞬時轉化核桃的Southern雜交鑒定
        4.2.5 Evans blue染色
        4.2.6 瞬時轉化核桃JrsHSP17.3 基因的生理指標測定
    4.3 結果與分析
        4.3.1 核桃過表達載體的構建
        4.3.2 轉JrsHSP17.3 核桃的southern雜交分析
        4.3.3 JrsHSP17.3 基因的瞬時表達分析
        4.3.4 利用Evans blue研究瞬時侵染核桃幼苗細胞受損情況
        4.3.5 轉JrsHSP17.3 基因核桃的生理指標分析
    4.6 討論
    4.7 本章小結
結論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]過量表達LeHSP21.5減緩番茄的UPR應答并增強其耐逆性[D]. 趙春梅.山東師范大學 2006

碩士論文
[1]逆境脅迫下水稻（Oryza sativa L.）rHsp90基因的克隆及功能分析[D]. 劉大麗.東北林業(yè)大學 2006



本文編號：3457754