高效簡單的遺傳轉(zhuǎn)化是開展基因功能分析和基因工程的基礎(chǔ)。本試驗以花粉為轉(zhuǎn)化受體,進行超聲波處理,對大白菜花粉處理的花粉懸浮液濃度和超聲波功率參數(shù)進行了選擇,對卡那霉素的抗性濃度也進行了篩選。同時,本試驗對抽薹大白菜植株進行了真空滲入處理。得到以下結(jié)論。1.將大白菜花粉作為轉(zhuǎn)化受體時,能最大限度的保持滲透壓的平衡,使花粉能保持正常形態(tài)而不至于吸水太多導致脹破的花粉懸浮液蔗糖濃度為0.4 mol/L。2.在工作時間5 s、間隔時間5 s、處理次數(shù)8的條件下,對大白菜花粉超聲波功率進行了篩選,最終選擇的適宜超聲波功率為90W。3.通過對白菜幼芽子葉的顏色、生長點以及根的生長狀況的觀察分析,認為大白菜種子抗性篩選適宜的卡那霉素質(zhì)量濃度為30 mg/L。4.采用真空滲入法,將蘿卜VPE1基因的干擾載體pRNAi-RsVPE1轉(zhuǎn)化大白菜,共收獲2414粒種子,在質(zhì)量濃度為30 mg/L的卡那霉素篩選下獲得抗性株297株,其中9株經(jīng)PCR檢測呈陽性,轉(zhuǎn)化率為0.37%。Real-time PCR檢測結(jié)果表明:pRNAi-RsVPE1的轉(zhuǎn)入導致了轉(zhuǎn)基因大白菜葉片中同源的BraVPE在RNA水平上的表達量... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 DNA直接導入法
    1.2 農(nóng)桿菌介導法
        1.2.1 農(nóng)桿菌介導的葉盤轉(zhuǎn)化法
        1.2.2 農(nóng)桿菌介導的原位轉(zhuǎn)化法
    1.3 本研究的目的與意義
第二章 大白菜花粉介導轉(zhuǎn)基因的幾個因素優(yōu)化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 不同蔗糖濃度花粉懸浮液對花粉形態(tài)的影響
        2.2.2 不同超聲波功率對花粉的影響
        2.2.3 卡那霉素篩選
        2.2.4 轉(zhuǎn)基因種子的篩選以及PCR檢測
    2.3 討論與結(jié)論
第三章 基于真空滲入法的轉(zhuǎn)基因大白菜植株的獲得
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 轉(zhuǎn)基因植株的獲得以及PCR檢測
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因植株的VPE基因表達分析
    3.3 結(jié)論與討論
第四章 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3331270